التغيرات الشكلية في البكتيريا باستخدام المجهر الفلوري للخلايا الحية

ابدأ بزراعة بكتيرية ثابتة تحت لوح أغاروز في طبق ذو قاع زجاجي.

أغشية الخلايا البكتيرية موسومة بصبغة فلورية.

كما تم تصميم البكتيريا للتعبير عن RNA مضاد للحس يستهدف mRNA محدد، مما يثبط إنتاج بروتين انقسام الخلية الأساسي.

أضف قطرة من زيت الغمر إلى هدف المجهر الفلوري المقلوب.

ضع الطبق في غلاف معدني وثبته على مرحلة المجهر.

ارفع الهدف حتى يلامس الزيت الطبق، ثم ركز على الخلايا.

استخدم برامج التصوير لضبط مكدس Z لالتقاط الصور على أعماق متعددة.

ابدأ في التقاط صور تايم لابس بالفلورة.

عندما تستجيب الخلايا لتعبير الحمض النووي الريبي المضاد، تفشل في الانقسام وتطور أشكالا متورمة.

يتعطل تنظيم الغشاء، مما يؤدي إلى فلورة غير متساوية وبؤرية تشير إلى انقسام خلل في الخلايا.

لتصوير العينة، استخدم مقبض التركيز على الضبط الخشن للتأكد من أن الهدف منخفض بالكامل قبل تهيئة المجهر داخل برنامج المجهر. ضع قطرة زيت بمعامل انكسار 1.517 في هدف الغمر 100X للنفط، وانقل الطبق ذو القاع الزجاجي الذي يحتوي على العينة إلى التابوت المعدني.

قم بإدخال الطبق برفق داخل مشبك المسرح، واستخدم مقبض الضبط الخشن لرفع الهدف حتى يلامس الزيت قاع الزجاج للطبق. استخدم العدسة وزر الضبط الدقيق لجعل العينة في التركيز، ثم انتقل إلى وضع الكاميرا. في برنامج التصوير على نافذة Resolve ثلاثية الأبعاد، اختر أيقونة التصميم/تشغيل التجربة.

سيظهر مربع حوار جديد بعنوان التصميم/التشغيل للتجربة. افتح علامات التبويب Design و Sectioning في مربع الحوار لتحديد عدد مكدسات Z وسمك العينة. لقياس سمك الخلايا في العينة، قم بضبط مستوى Z تدريجيا باستخدام الأسهم للأعلى والأسفل في مربع حوار Resolve 3D، مما يجعل مكان خروج الخلايا عن التركيز هو الحد الأعلى والسفلى لاكتساب الصورة.

بعد ضبط نسبة انتقال شدة الضوء ومدة التعريض للقنوات المختارة في مربع حوار الحل ثلاثي الأبعاد، انقر على قائمة النقاط لفتح قائمة النقاط. في تبويبات التصميم والزمن الزمني (Time Lapse)، اختر مربع اختيار Time Lapse وأدخل معلمات التايم لابس. اختر خيار قائمة نقاط الزيارة، وأدخل النقاط التي سيتم تصويرها في مربع النص، مع فصل النقاط بفواصل أو شرطات لتسلسلات كاملة.

بعد ذلك، قم بتحرير أسماء الملفات ومواقع الملفات في تبويب التشغيل واختر تشغيل في مربع حوار بدء التجربة لبدء التجربة.