موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:33 دقيقة • February 26th, 2026
ابدأ بألواح تحتوي على بكتيريا ملتصقة بالسطح وبكتيريا العوالق أو العائمة الحرة.
أضف خلايا الأميبا إلى كلا العينتين.
ضع وسادة أغاروز تحتوي على كالسيين-AM، صبغة نفاذة للخلايا، فوق كل عينة.
أزل السوائل الزائدة، واترك ليجف، وحضن الصحون.
في الصفيحة التي تحتوي على البكتيريا السطحية، يرفع الاتصال السطحي جينات الضراوة، معبرا عن السموم.
هذه السموم تعطل غشاء الأميبا وتغير شكلها.
يسمح غشاء الأميبا التالف بدخول المزيد من الكالسيين-AM إلى السيتوبلازم، حيث تقطعها الإسترازات داخل الخلية إلى كالسين الفلوري، مما يؤدي إلى تراكمها.
أما البكتيريا العوالقة، التي تفتقر إلى الاتصال السطحي، فتبقى غير قاتلة، مما يترك أغشية الأميبا سليمة. يقلل هذا من دخول كالسين AM إلى الأميبا، مما يحد من تراكم الكالسين الفلوري.
كما تبتلع الأميبا الصحية البكتيريا غير الضارة.
تحت المجهر الفلوري، تشير خلايا الأميبا الساطعة المستديرة إلى تفاعل بكتيري ضار، بينما تشير الأميبا الخافتة غير المتبلورة إلى تفاعل بكتيري غير ضار.
لقياس ضراوة الخلايا البكتيرية المرتبطة بالسطح، أضف 10 ميكرولترات من خلايا الأميبا من الخلايا البكتيرية المثبتة على السطح التي تم الحصول عليها سابقا.
لعزل الخلايا العوالية، انقل 10 ميكرولتر من الثقافة إلى طبق بتري طازج.
بعد ذلك، قم بقياس ضرابة الخلايا العوالقة عن طريق خلط 10 ميكرولترات من خلايا الأميبا مع البكتيريا العوالقة التي تم الحصول عليها سابقا.
ضع فورا وسادة الأجار الصغيرة فوق خليط الأميبا البكتيريا المناسب على سطح طبق البتري.
ثم أزل السائل الزائد عن طريق تفريغ السائل الزائد بلطف، ودع الطبق يجف لمدة 20 دقيقة.
غط الطبق بالغطاء وحضنه في درجة حرارة الغرفة لمدة 40 دقيقة إضافية. وأخيرا، استخدم مجهر فلوري لالتقاط صور لما لا يقل عن 100 خلية أميبا.