JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 2:03 د • February 26th, 2026
ابدأ بطحال فأر مصاب مسبقا بالبكتيريا الممرضة.
ضع الطحال في محلول ملحي بارد مخزن بالفوسفات للحفاظ على القدرة على البكتيريا.
باستخدام جهاز التجانس، قم بتجانس الطحال لتعطيل ميكانيكيا وإطلاق البكتيريا داخل الخلية إلى المخزن الخلوي.
ينتج عن ذلك تعليق بكتيري يعكس العبء الكلي للبكتيريا داخل الطحال.
إجراء تخفيف متسلسلي للمتجانس لتقليل كثافة البكتيريا في المحلول لتحديد عدد البكتيريا بدقة.
بعد ذلك، خذ طبق أجار مغذي مقسم إلى قسمين.
ضع نفس التخفيف البكتيري على كل جزء من صفيحة الأجار لتوليد التكرار.
اترك الطبق ليجف، ثم عكسه واحتضن. خلال فترة الحضانة، تتكاثر البكتيريا الحية وتشكل مستعمرات مميزة.
عد المستعمرات من كل جزء من الصفيحة لحساب متوسط وحدات تكوين المستعمرات، أو CFUs، والتي تمثل إجمالي العبء البكتيري في الطحال أثناء العدوى.
الطحال في أنبوب بسعة 15 مليليتر يحتوي على ملليلترين من PBS. بعد ذلك، استخدم متجانسات فردية قابلة للتخلص لكل عينة لنقع الأنسجة على الثلج، تليها تخفيف تسلسلي لمواد الأنسجة.
قم بتغليف التخفيفات بشكل مكرر على جانبين منفصلين من صفيحة TSA واحدة، ودع العينات تجف لفترة وجيزة. ثم قلب الألواح وزرع العينات في حاضنة ثابتة بدرجة حرارة 37 درجة مئوية طوال الليل، مع متوسط مستعمرات البكتيريا من جانبي الصفيحة ومن كل تخفيف في صباح اليوم التالي.