تقييم تأثيرات المثبطات على تكوين الحبيبات في العصية السببية

ابدأ بزراعة بكتيريا تربية Bacillus subtilis، وهي بكتيريا في التربة، تزرع في وسط غني بالمغذيات.

يقوم بالطرد المركزي لإزالة البكتيريا، ثم التخلص من المادة الفائقة، ثم إعادة تعليق الحبيبة في وسط محدد كيميائيا يدعم تكوين الأغشية الحيوية.

قياس الكثافة البصرية للزراعة لتحديد التركيز المناسب للبكتيريا.

أضف الثقافة إلى الآبار التي تحتوي على وسط محدد للتحكم والوسط المحدد مع مثبط للاختبار.

حضن تحت ظروف ثابتة. تهاجر البكتيريا للأعلى وتتراكم عند واجهة الهواء والسائل، حيث يدعم توفر الأكسجين المتزايد نمو البكتيريا.

في بئر التحكم، تفرز البكتيريا عند الواجهة مكونات مصفوفة خارج الخلية وتشكل غشاء حيوي عائما يعرف باسم البليكل، وهي طبقة واقية تعزز بقاء البكتيريا.

في بئر الاختبار، يعطل المثبط تخليق المصفوفة، مما يؤدي إلى انتشار تجمعات البكتيريا.

يظهر هذا الاختبار أن المثبطات تمنع تكون الغشاء الحيوي، وهو سمة رئيسية في تكوين المرض البكتيري.

أولا، اختر مستعمرة واحدة مناسبة وانقلها إلى 3 ملليلتر من مرق LB. ضع هذه الثقافة في حاضنة تهز لمدة 4 ساعات عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. بعد الحضانة، خذ 1.5 ملليلتر من الزراعة البادئ وجهاز الطرد المركزي لمدة أربع دقائق.

أزل السوبرناتانت بحذر، ثم أعد تعليق الحبيبة في 1.5 ملليلتر من MSgg المتوسط. لنمو الحبيبات، حضر صفيحة زراعة خلايا مكونة من 12 بئر بإضافة 3 ملليلتر من MSgg إلى كل بئر. أضف إلى بعض هذه الآبار MSgg مع مثبط جزيء صغير في نطاق تركيز، موزعا مواقع تركيزات مختلفة حول الطبق، لتجنب تأثيرات الحواف.

قس الكثافة البصرية عند 600 نانومتر من ثقافة البداية المعلقة. يجب أن تكون الثقافة بين 0.6 و1. وهذا أمر حاسم لقوة النظام.

قم بتطعيم كل بئر من لوح الزراعة بسعة 3 ميكرولتر من الزراعة المعاد تعليقها. ثم حضن اللوحة عند 23 درجة مئوية لمدة ثلاثة أيام تحت ظروف ثابتة. بعد ذلك، أزل اللوحة من الحاضنة، وراقب الحبيبات.