اختبار مقاومة الإيثانول لتقييم سلامة مصفوفة الأغشية الحيوية

خذ أغشية حيوية مشتقة من البكتيريا الممرضة تنمو على الأجار المغذية.

يتميز الغشاء الحيوي غير المعالج ببكتيريا مكتظة بكثافة داخل مصفوفة حماية خارج الخلية.

يتميز الغشاء الحيوي المعالج بالمثبطات بخلايا مرتبطة بشكل فضفاض ضمن مصفوفة متفرقة.

اقسم كل طبقة حيوية إلى نصفين، ثم تعرض نصف واحد للعزل كعنصر تحكم، والآخر للإيثانول لفرض إجهاد مضاد للميكروبات.

في الغشاء الحيوي غير المعالج والمعرض للإيثانول، تقلل المصفوفة الكثيفة من انتشار الإيثانول وتحد من اختراق الخلايا، مما يقلل من قتل البكتيريا.

في الغشية الحيوية المعالجة بالمثبطات والمعرضة للإيثانول، تسمح المصفوفة المتناثرة للإيثانول بالاختراق بسهولة أكبر، مما يؤدي إلى زيادة قتل البكتيريا.

قم بعمل الطرد المركزي للأنابيب وإزالة السوبرناتانت. أضف العزل والصوت لتشتيت الخلايا.

قم بتغليف المعلقات المخففة واحتضنها للسماح بنمو البكتيريا القابلة للحياة.

وحدات تشكيل المستعمرات (CFUs)؛ تؤكد وجود عدد أقل من الفروع الكيميائية من الغشاء الحيوي المعالج بالمثبطات والمعرض للإيثانول أن سلامة المصفوفة ضرورية لمقاومة الإيثانول.

خذ شفرة حلاقة نظيفة وقطع مستعمرات الغشاء الحيوي إلى جزأين متساويين بمساعدة القالب. ارفع نصف المستعمرة بعناية باستخدام ملعقة نظيفة، وانقله إلى أنبوب طرد مركزي دقيق بسعة 1.5 ملليلتر، يحتوي على 500 ميكرولتر من PBS.

خذ النصف الثاني من المستعمرة وانقله إلى