طريقة زجاجية مغطاة بغرف لتكوين الأغشية الحيوية البكتيرية في المختبر

خذ مزرعة من بكتيريا تشكل الأغشية الحيوية تنمو في وسط غنية بالمغذيات.

قم بتخفيف الزراعة في وسط جديد وحضنه بالهز لتعزيز نمو البكتيريا حتى الوصول إلى التركيز المطلوب.

بعد ذلك، أضف الثقافة إلى وسط جديد غني بترشيح بلغم مشتق من التليف الكيسي من المرضى.

تحتوي هذه الترشيحات على عوامل مشتقة من المضيف تهيئ البكتيريا لتكوين الأغشية الحيوية.

قم بتوزيع التعليق المحضر في آبار زجاج الغطاء المحجوز وحضانه بشكل ثابت للسماح للبكتيريا بالالتصاق بسطح الزجاج.

بعد الحضانة، أزل الوسط وشطف الآبار بلطف بوسط طازج للقضاء على البكتيريا غير الالتصقة.

أضف وسائط جديدة تحتوي على ترشيح البلغم إلى الآبار ومرة أخرى حضن الحجرة بشكل ثابت.

خلال الحضانة، تقوم العوامل المشتقة من المضيف في الوسط بتنشيط مسارات الإشارات البكتيرية التي تحفز إنتاج المصفوفة خارج الخلية وتعزز تطور الأغشية الحيوية المنظمة.

الغشاء الحيوي جاهز الآن لمزيد من التحليل.

ضع 40 ميكرولتر من الزراعة المحضرة مسبقا في 4 ملليتر من مرق لوريا الطازج، أو وسط LB، وانمو البكتيريا للحصول على مزرعة بكثافة بصرية 0.55 عند 600 نانومتر.

بعد ذلك، قم بتخفيف 100 ميكرولتر من زراعة 0.5 OD في 400 ميكرولتر من ترشيح بلغم 10٪ محضر بوحدة LB. استخدم 200 ميكرولتر من التخفيف لزرع آبار غرف الانزلاق.

دع البكتيريا تلتصق لمدة أربع ساعات عند درجة حرارة 37 درجة مئوية دون أن تهتز.

بعد أربع ساعات، أزل