موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:32 دقيقة • February 26th, 2026
حضن زجاجا زجاجيا يحتوي على بكتيريا ملتصقة في وسط مدعوم بترشيح بلغم مشتق من المريض التليف الكيسي وفي الوسط فقط.
يحتوي مرشح البلغم على مكونات مشتقة من المضيف تحفز مسارات الإشارات البكتيرية، مما يحفز إنتاج المصفوفة وتكوين الأغشية الحيوية.
بمجرد تكوين الأغشية الحيوية، تخلص من الوسط الذي يحتوي على بكتيريا عائمة بالقوة ومكونات مشتقة من المضيف المتبقية.
اغسله باستخدام محلول مؤقت لإزالة البكتيريا المتشابكة بشكل غير مرتبك.
أضف خليط تلوين يحتوي على أصباغ فلورية منفذة للغشاء وغير منفذة للغشاء، وحضن في الظلام.
تعبر الصبغة النفاذية للغشاء الأغشية السليمة، موسمة على البكتيريا الحية وغير القابلة للحياة. في المقابل، تدخل الصبغة غير المنفذة فقط الأغشية التالفة، مما يضع علامة انتقائية على البكتيريا غير القابلة للحياة.
بعد الحضانة، أزل محلول التلوين واغسل باستخدام المحلول المؤقت للتخلص من الصبغة الزائدة وتقليل الفلورة الخلفية.
أضف وسط جديد واحصل على صور باستخدام المجهر الكونفوكلي.
تظهر الأغشية الحيوية المزروعة بفلترات البلغم سمكا متزايدا، مما يبرز دور المكونات المشتقة من المضيف في تكوين الأغشية الحيوية.
بعد النمو، قم بإزالة الوسائط من آبار الغرفة وغسل كل غرفة بلطف مرتين باستخدام 300 ميكرولتر من PBS المعقم.
بعد ذلك، لتحضير خليط التلوين الحيوي، أضف 1 ميكرولتر من كل صبغة مقدمة في مجموعة الصلاحية لكل ملليلتر من المحلول المطلوب، وامزج المحلول.
يتم تحديد الكمية المثلى من الصبغ ووقت التلوين تجريبيا لكل كائن حي.
أضف 200 ميكرولتر من خليط التلوين إلى كل بئر من زجاج التغطية المجهز. حضن زجاج الغلاف.
بعد الحضانة، أزل خليط التلوين من الحجرات واغسل كل بئر بسعة 300 ميكرولتر من PBS المعقم.
استبدل PBS بوسائط جديدة. وأخيرا، تابع التصوير عبر المجهر الكونفوكلي.