العلاج بتنشيط الضوء للأغشية الحيوية البكتيرية باستخدام مادة حساسة للضوء

ابدأ بآبار الصفائح الدقيقة التي تحتوي على أغشية حيوية لبكتيريا ممرضة، مقسمة إلى أربع مجموعات تجريبية.

استنشق الوسط بلطف وشطفه بمحلول مؤقت لإزالة الخلايا غير الالتصقة.

أضف مخزن مؤقت يحتوي على مادة تمهيدية للحساسية الضوئية إلى مجموعتين، بينما تحصل المجموعتان المتبقيتان على المخزن المؤقت فقط.

حضن جميع المجموعات في الظلام للسماح للسلف بالانتشار عبر الأغشية الحيوية، والدخول إلى الخلايا البكتيرية، والاستقلاب إلى حساس ضوئي يتراكم داخل السيتوبلازم والأغشية.

بعد الحضانة، تعرض مجموعة واحدة معالجة بالمقدمات ومجموعة واحدة فقط من المخزن لأشعة الضوء.

في المجموعة المعالجة بالمقدمات، يحفز الضوء الحساس الضوئي، الذي ينقل الطاقة إلى الأكسجين الجزيئي ويولد أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS).

يقوم ROS بتعطيل الأغشية، وتحلل البروتينات، وتجزئة الحمض النووي، مما يؤدي إلى موت الخلايا البكتيرية.

الحالات الثلاثة الأخرى تفشل في إنتاج ROS، حيث يغيب السلف أو الضوء، مما يترك الغشاء الحيوي دون تأثر.

لتوليد غشاء حيوي في صفيحة بحجم 96 بئر، قام أولا بتلقيح واحد ناقص 80 درجة مئوية مذاب المكورات العنقودية الذهبية الأمريكية 300 في ثلاث أغشية حيوية مكونا ثقافات إجهاد سريرية في أنابيب مستديرة القاع بحجم 14 ملليتر تحتوي على خمسة ملليتر من مرق الصويا التريبتوني، أو TSB، وسط، في حاضنة بدرجة حرارة 37 درجة مئوية مع هز طوال الليل. عندما تصل الزراعة إلى مرحلة الثبات، يقوم بطرد مركزي الخلايا البكتيرية وإعادة تعليق الحبيبات وPBS إلى تركيز 2 في 10 إلى الوحدة التاسع لتكوين المستعمرة لكل مليلتر. يتم تخفيف هذه المعلقات البكتيرية بنسبة 1 إلى 200 ويتم إضافة وسط TSB إلى جلوكوز صفر فاصلة خمسة بالمئة وزرع 200 ميكرولتر من الخلايا البكتيرية لكل بئر إلى ثلاثة آبار لكل سلالة لكل مجموعة تجريبية في زراعة خلايا البوليسترين معالجة ب 96 بئر للحضانة لمدة 24 ساعة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية، مع الأكسجين. دون ارتجاف.

في اليوم التالي، اغسل الآبار بلطف ثلاث مرات باستخدام PBS دون إزعاج الأغشية الحيوية. بعد ذلك، أضف 200 ميكرولتر من ALA المحضر حديثا إلى الآبار التجريبية المناسبة، وضع اللوحة عند 25 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة محمية من الضوء. ثم قم بإشعاع اللوح بصمام ثنائي يصدر ضوء بقوة 100 ميلي واط لكل سنتيمتر مربع من شدة الضوء لمدة ساعة واحدة.