تحضير العينة وتصوير البكتيريا الموسومة بالفلورية

ابدأ بشريحة زجاجية كبيرة مع شرائح زجاجية أصغر موضوعة على كلا الحافتين في طبقتين.

اسكب الأغاروز المنصهر في المكان وغطه بشرحاق زجاجي كبير آخر.

قم بتهدئة الإعداد لتتصلب الأغاروز.

أزل شرائح الزجاج وقطع الأغاروز إلى وسادات صغيرة.

ضع وسادات الأغاروز داخل إطار لاصق مثبت على شريحة كهربائية.

خذ مزرعة من البكتيريا الممرضة، المعدلة وراثيا للتعبير عن نظام إفراز موسوم بالفلورية ضروري لعدوى المضيف.

استخدم رقعة بكتيرية كثيفة وعلقها في الماء.

دوامة لتشتت البكتيريا بشكل متساو.

ضع التعليق على وسادة الأغاروز لتثبيت حركة البكتيريا.

أغلق بغطاء غطاء للحفاظ على الترطيب.

تحت إضاءة الحقل المضيء، اختر حقلا من الخلايا للتصوير.

تحسين إعدادات المجهر لتقليل التبييض الضوئي وزيادة حساسية الإشارة.

التحول إلى قناة الفلورة لاكتشاف البكتيريا الموسومة بالفلورية.

ابدأ بصنع وسادات أجاروز لتصوير الخلايا الحية. حضر حوالي 30 ملليلتر من محلول أغاروز منخفض الذوبان بنسبة 1٪ في الماء وقم بتسخينها في قارورة زجاجية لمدة حوالي 90 ثانية، مع تدويره بين الحين والآخر حتى يذوب الأغاروز تماما.

ضع منزلقتين زجاجيتين بحجم 22 × 22 × 0.15 ملم على حافة شريحة زجاجية بحجم 25 × 75 × 1.1 ملم، واحدة فوق الأخرى. ثم تكدس منزلقتين صغيرتين على الحافة الأخرى. ضع حوالي 1 ملليلتر من الأغاروز المنصهر في الشريحة المركزية بين الشريحتين الزجاجيتين العلويتين، وضع شريحة كبيرة أخرى فوق الأغاروز المنصهر، مع التأكد من تجنب تكون فقاعات الهواء.

برد السلايدات على درجة حرارة أربع درجات مئوية لمدة 15 دقيقة، ثم استخدم مشرط أو شفرة حلاقة لتقطيع الوسادة بلطف إلى مربعات صغيرة. ثبت إطار لاصق مزدوج الجوانب على شريحة زجاجية بحجم 25 × 75 × 1.1 ملم وضع عدة وسادات على الشريحة. قم بإذابة بقعة ثقيلة من Legionella pneumophila في 1 ملليلتر من الماء المقطر المزدوج.

ثم أضفوا دوامة، واستخدم الماصة 2 إلى 3 ميكرولتر من التخفيف على الوسادات. ضع غطاء بحجم 58 في 24 × 0.15 ملم بلطف فوق الإطار اللاصق. اختر الخلايا للتصوير باستخدام إضاءة مجال ساطع.

ثم، في نافذة التقاط برنامج المجهر، قم بضبط ND إلى 180 والتغليف إلى 2 في 2. استخدم قناة 488 نانومتر لتعريض العينة لمدة 500 إلى 1000 مللي ثانية وتحقق من خصوصية الفلورة من خلال تصوير رئوة ليجيونيلا غير الموسومة بنفس المعايير.