قياس كمية كلستريديوم ديفيسيل في عينات البراز من نموذج فأر مصاب

ابدأ بفأر استعمر جهازه الهضمي كلستريديوم ديفيسيلي، وهو ممرض بكتيري لاهوائي يشكل الأبواغ.

قيد الفأر ودعه يتبرز بشكل طبيعي داخل أنبوب معقم ووزن مسبقا.

تحديد الوزن الصافي لعينة البراز عن طريق طرح وزن الأنبوب الفارغ من الوزن الكلي لتحضير التخفيف المناسب.

نقل العينة إلى بيئة لا هوائية للحفاظ على قدرة البكتيريا الحساسة للأكسجين.

أضف عازل للعينة وقم بتعطيلها ميكانيكيا لتحرير محتوياتها إلى حالة تعليق.

تحضن للسماح بالحطام الأكبر بالاستقرار، مع الاحتفاظ بالخلايا البكتيرية والأبواغ في السوبرناتانت.

قم بإجراء تخفيف متسلسلي للمادة الفائقة في المخزن المؤقت.

قم بتلوين التخفيفات على وسط انتقائي واحتضنها في ظروف لاهوائية.

تعزز الأوساط إنبات الأبواغ والنمو الانتقائي لكلوستريديوم ديفيسيل بينما تثبط البكتيريا المتنافسة، مما يؤدي إلى مستعمرات مميزة.

عد المستعمرات لقياس كمية كلوستريديوم ديفيسيل في البراز وتقييم استعمار الجهاز الهضمي.

لجمع عينات البراز من الفئران للتقييم، قم أولا بتقييد الفأر الموضوع بخفة ولكن بقوة من الجلد الفضفاض على الرقبة والظهر، لضمان عدم تعرض الحيوان للضيق.

باستخدام إصبع الخنصر، ارفع ذيل الحيوان برفق، كاشفا عن فتحة الشرج. امسك أنبوب طرد مركزي دقيق معقم بوزن معروف مباشرة تحت فتحة شرج الحيوان، لضمان عدم لمس الأنبوب الفأر مباشرة. عندما يتغوط الحيوان، اجمع الحبيبات البرازية في الأنبوب.

خزن الأنبوب في درجة حرارة الغرفة حتى يتم جمع جميع العينات اللازمة. وزن الأنابيب التي تحتوي على البراز على مقياس تحليلي وسجل الكتلة إلى أربعة مخارج عشرية. احسب وزن الحبيبات البرازية بطرح وزن الأنبوب.

بعد ذلك، احسب تخفيفا من واحد إلى عشرة للمحتويات وأعد تعليقها إلى 1x PBS. استخدم طرف الماصة لتعطيل المادة البرازية بلطف حتى تذوب في المحلول. حضن العينات في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة، مع السماح لمحتوياتها بالاستقرار.

مع الحفاظ على المحاليل بشكل لاهوائي، قم بتخفيف تسلسلي لكل عينة في 1x PBS. نقل 100 ميكرولتر من كل تخفيف تسلسلي إلى ألواح TCCFA. استخدم موزع معقم على شكل حرف L وطبق الوسط بشكل متساو على الألواح.

حضن الصفائح في ظروف لاهوائية عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. وأخيرا، قم بتعداد مستعمرات C.difficile وحساب وحدة تكوين المستعمرة لكل غرام من محتوى البراز.