JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 2:26 د • March 31st, 2026
خذ يرقة سمكة الزرد المخدرة في أخدود قالب الأروز. يرتفع رأسه بزاوية للوصول إلى الأمعاء أثناء الحقن.
غطه بأغروز منخفض الذوبان، ثم دع الأغاروز يتصلب ويثبب اليرقة.
خذ إبرة حقن دقيقة تحتوي على بكتيريا ممرضة معلقة في محلول صبغة متتبعة.
تحت المجهر المجسم، ضع الإبرة بزاوية ووجه الإبرة عبر الأغاروز إلى فم اليرقة.
قم بدفعه عبر أنبوب الطعام إلى الأمعاء.
حقن البكتيريا في تجويف الأمعاء وتأكيد التوصيل باستخدام صبغة التتبع. هذه الطريقة غير الجراحية، المسماة ميكروغافاج، تحاكي مسار العدوى الطبيعي.
اسحب الإبرة. اقطع الأجاروز وانقل اليرقة إلى وسط طازج.
تتكاثر البكتيريا وتطلق سموما تضر بظهارة الأمعاء، مما يعزز غزو البكتيريا واستيطان الأنسجة العميقة.
نموذج إصابة سمك الزرد جاهز للتحليل.
في صفيحة أجاروز بنسبة 1.5٪ مع أخاديد، ضع قطرة من أجاروز منخفضة الذوبان بنسبة 0.8٪ على يرقات سمك الزرد لتغطيتها.
عدل اليرقات بلطف بحيث تكون الرؤوس متجهة للوضع العمودي بزاوية 45 درجة في الأخدود والذيل مقابل جدار الأخدود. قم بتشغيل الإبرة بلطف عبر الأغاروز، ثم إلى فم يرقات سمك الزرد، ثم عبر المريء. بمجرد أن يكون طرف الإبرة داخل البصلة الأمامية للأمعاء، اضغط على دواسة الحقن لإطلاق 0.5 إلى 1 نانولتر من مزرعة البكتيريا.
املأ تجويف الأمعاء. لا تدعه يفيض من المريء أو الفتحة. اسحب الإبرة برفق من فم سمكة الزرد. بعد الجافاج، يتم إنقاذ يرقات سمك الزرد المصابة من الأغاروز باستخدام رأس محمل دقيق مرن أولا عن طريق قطع الأغاروز بعيدا، ثم رفع اليرقات.