التصوير عالي الإنتاجية لعدوى البروسيلا الإجهاضية داخل الخلايا في خلايا ظهاري المضيف

ابدأ بالخلايا الظهارية التي تم فيها تقليل تعبير بروتين مكيف الإنترفيرون، وهو وسيط رئيسي للمناعة الفطرية، مما يجعل الخلايا أكثر عرضة لعدوى بروسيلا .

استبدل الوسط بوسط عدوى يحتوي على بروسيلا أبورتوس (بروسيلا أبورتوس) البروتين الفلوري الأخضر المعبر، وهو ممرض داخلي اختياري، بالتركيز المطلوب.

يقوم بالطرد المركزي في الصفيحة لتعزيز الاتصال بين البكتيريا وخلايا المضيف، ثم يحتضن للسماح باستيعاب البكتيريا.

اغسل الخلايا بوسط يحتوي على المصل، وعالجها بمضاد حيوي للقضاء على البكتيريا خارج الخلية.

حضن أكثر للسماح للبروسيللا بالتكاثر داخل الخلية.

اغسل الخلايا بالمحلول المؤقت وتثبيتها بالبارافورمالديهايد للحفاظ على الهياكل داخل الخلية.

اشطف المثبت الزائد. ثم أضف محلول مغذي بالمنظفات لنفير الخلايا.

اغسل المنظف المتبقي، ثم أضف DAPI لتلوين النوى، وقم بغسل نهائي.

باستخدام المجهر الآلي، احصل على صور عالية الإنتاجية لعدوى بروسيلا في خلايا الظهارة المضيفة.

باستخدام غسالة ألواح آلية، استبدل وسط النقل ب 50 ميكرولتر من وسط العدوى. داخل الغطاء، انقل اللوح إلى قفص الطرد المركزي وقم بطرد مركزي بلوحة 384 بئر عند 400 مرة في الجرام وأربع درجات مئوية لمدة 20 دقيقة.

ثم استخدم بارافيلم لإغلاق اللوح وحضنه على لوح ألمنيوم مسخن مسبقا عند درجة حرارة 37 درجة مئوية و5٪ ثاني أكسيد الكربون_لمدة أربع ساعات. بعد الحضانة باستخدام غسالة ال