JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 2:32 د • March 31st, 2026
ابدأ بشتلات الأرابيدوبسيس ثاليانا المزروعة على دعامات شبكية منخفضة الكثافة تطفو على سطح وسط نمو سائل في نظام خال من التربة.
تم تطعيم هذه الشتلات مسبقا ببكتيريا تستعمر الجذر وتشكل طبقة حيوية.
امسك الشتلة، واقرص الساق أسفل الأوراق بلطف باستخدام الملقط.
ثم ارفع الشتلة من الشبكة دون إتلاف الجذر، مع الحفاظ على بنية الجذر المستعمرة.
انقل الشتلة إلى صفيحة متعددة الآبار تحتوي على ماء مقطر مزدوج.
غط اللوحة بورق الألمنيوم وقم بسونيك العينات باستخدام جهاز صوت متعدد الأطراف لتعطيل الغشاء الحيوي وإزالة البكتيريا من سطح الجذر.
بعد الصوت، استخدم التعليق البكتيري الصوتي لتحضير التخفيف التسلسلي.
ضع العينات المخففة على ألواح الأجار وأضف خرز زجاجي لتوزيع البكتيريا بشكل متساو.
قم بإزالة الخرزات وحضن الصفائح للسماح للبكتيريا الحية بتكوين مستعمرات.
تشكل المستعمرة يؤكد استيطان الجذور الناجح من قبل البكتيريا في النظام الخالي من التربة.
بعد الشطف، أزل الشتلات من الشبكة عن طريق وضع ملقط معقم باللهب بلطف تحت الأوراق على جانب الورقة من الشبكة. اضغط الساق برفق، وحرك الشتلات للأعلى بعيدا عن الشبكة لإزالة الجذر دون كسره. لإزالة البكتيريا من جذور النباتات، انقل الشتلات من كل شبكة إلى آبار فردية من صفيحة صوتية مكونة من 24 بئرا تحتوي على ملليلتر واحد من الماء المقطر المزدوج.
يتم تصويب جميع العينات داخل اللوحة دفعة واحدة، باستخدام جهاز صوت متعدد الأطراف كما هو موصوف في المخطوطة. لقياس كمية البكتيريا، قم بتخفيفات متتالية بمقدار 10 مرات للعينات الصوتية في وسط نمو البكتيريا. انشر باستخدام خرز زجاجي معقم، وحضن عند درجة الحرارة المثلى للبكتيريا حتى تصبح المستعمرات الفردية قابلة للعد.