موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:00 دقيقة • March 31st, 2026
ابدأ بخلايا السيانوبكتيريا الثابتة والثابتة والمنفاذة الملتصقة بطبقة غطاء.
تعبر هذه الخلايا الزرقاء البكتيرية عن بروتينات منخفضة الوفرة لتنظيم النمو.
أثناء التصوير الفلوري عالي الدقة، تصدر الأصباغ الطبيعية الحساسة للضوء داخل الخلايا السيانوبكتيرية فلورة خلفية.
وهذا يقلل من جودة الصورة عند تصوير هذه البروتينات منخفضة الوفرة.
لتقليل هذا التألق الخلفي، ضع غطاء الغطاء الذي يحتوي على الخلايا البكتيرية الزرقاء في طبق صبغ.
أضف حاجزا حاجزا يحتوي على بروتينات المصل لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة أثناء المعالجة اللاحقة ومنظف للحفاظ على نفاذية الخلايا.
ضع طبق التلوين على الثلج وعرض الخلايا لضوء زينون شديد.
يبدأ الضوء عالي الشدة التبييض الضوئي، مما يحلل الأصباغ الحساسة للضوء، بينما تبقى البروتينات منخفضة الوفرة التي تنظم النمو دون تأثر.
تقلل الظروف الباردة من الضرر الناتج عن الحرارة وتحافظ على سلامة الخلايا.
تمكن هذه العملية من الرؤية الواضحة للبروتينات منخفضة الوفرة والمنظمة للنمو عبر التلوين المناعي أثناء المجهر الفلوري عالي الدقة.
انقل غطاء الغطاء المغسول إلى طبق التلوين.
أضف 50 ميكرولتر من المخزن الحاجز على سطح الغطاء الداخلي. ضع طبق التلوين بالكامل على الثلج ثم انقله تحت مصدر ضوء الزينون للتبييض الضوئي لمدة لا تقل عن 60 دقيقة. بعد التبييض الضوئي والحجز، استخدم حافة منشفة ورقية لإزالة حاجز الحاجز.