الكشف عن حساسية المضادات الحيوية البكتيرية باستخدام مجهر رامان المحفز للتشتت

ابدأ بعينات بكتيرية معالجة مسبقا بتركيزات متزايدة من مضاد حيوي يقضي على البكتيريا الحساسة.

أضف وسط نمو يحتوي على أكسيد الديوتيريوم ونفس تركيز المضاد الحيوي إلى الأنابيب المقابلة.

حضن الأنابيب تحت ظروف الاهتزاز.

يدخل أكسيد الديوتيريوم إلى الخلايا البكتيرية، حيث يتم دمج الديوتيريوم في الجزيئات الحيوية المصنعة حديثا، مكولا روابط كربون-ديوتيريوم.

قم بتدوير البكتيريا، وتخلص من السوبرناتانت، ثم اغسلها.

أضف مثبتا للحفاظ على البنية البكتيرية.

أضف الماء، والطرد المركزي، وأزل السوبرناتان.

أعد تعليق البكتيريا وانقل التعليق إلى زجاج مغلف بالبولي-إل-ليسين، ثم أغلقه.

ضع العينة على مرحلة مجهر تشتت رامان المحفز مسبقا أو مجهر SRS. أضف الماء وخفض الهدف.

التقاط صور لعدة حقول لتقييم تردد اهتزاز الكربون-ديوتيريوم.

عند تركيزات أعلى من المضادات الحيوية، تنخفض إشارة الكربون-ديوتيريوم، مما يشير إلى انخفاض القدرة على البكتيريا.

يتيح ذلك التقييم السريع لحساسية المضادات الحيوية من خلال ربط شدة إشارة SRS بفعالية البكتيريا.

بعد ساعة من الحضانة، أضف 700 ميكرولتر من المضاد الحيوي مخفف بشكل تسلسلي مع وسط يحتوي على 100٪ ديوتيريوم يحتوي على MHB إلى 300 ميكرولتر من البكتيريا المعالجة مسبقا بالمضاد الحيوي بنفس تركيز المضاد الحيوي. قم بتجانس الخليط عن طريق الرش بالضغط على الماصات صعودا وهبوطا عدة مرات. أضف 700 ميكرولتر من متوسط MH