موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:35 دقيقة • March 31st, 2026
ضع شريحة تحتوي على خلايا دموية ثابتة على مرحلة المجهر الكونفوكلي.
يتم الحصول على هذه الخلايا الدموية من يرقات ذبابة الفاكهة الميلانوغاستر وقد أصيبت بممرض بكتيري.
يتم وسم الخلايا الدموية ببروتين فلوري أخضر، وأنوية النوى مصبوغة بصبغة زرقاء، وتعبر البكتيريا عن البروتين الفلوري الأحمر للتصور.
قم بتكوين المجهر لاكتشاف جميع الفلوروفورات الثلاثة لتتبع مقصورات الخلايا ومسببات الأمراض في نفس الوقت.
باستخدام هدف عالي الدقة، ركز على الخلية الدموية المستهدفة لالتقاط تفاصيل تحت الخلية.
اضبط قوة الليزر وكسب الكاشف لتحقيق تعريض مناسب للعينات وتحسين وضوح الإشارة.
امسح عدة مستويات Z للتأكد من أن مستوى التعريض مناسب.
اضبط موقعي Z العلوي والسفلي لتصوير كامل الخلية الدموية.
استخدم تكبير المسح لعزل الخلية الدموية المعنية والحصول على صورة ثلاثية الأبعاد عالية الدقة.
تمكن هذه الطريقة من تصور موقع الممرض داخل الخلية الدموية.
قم بتكوين المجهر الكونفوكالي للتصوير بثلاثة ألوان ل DAPI وEGFP وmCherry.
ضع العينة على المجهر وركز عليها باستخدام هدف فتحة عدسة رقمية 63X/1.4. حدد موقع الخلايا الدموية المرغوبة في مجال الرؤية للتصوير. ثم ضبط قوة الليزر وكسب الكاشف لتحقيق التعريض المناسب للعينة.
تحقق من عدة مستويات Z للتأكد من أن مستوى التعريض مناسب لسمك العينة بالكامل. بعد ذلك، ابحث عن الموضع العلوي والسفلي على محور Z لخلية دموية كاملة. اضبط هذه المواقع كمواقع بداية ونهاية لتقسيم Z.
استخدم تكبير المسح لتصوير المنطقة التي تحتوي على الخلية الدموية. اجمع سلسلة الصور بدقة مناسبة، مثل 1024 في 1024 بكسل في مستوى X-Y، وتباعد 0.3 ميكرومتر في بعد Z.