تحليل خلية واحدة للتعبير الجيني من مسببات الأمراض المستخرجة من النباتات

خذ معلقا من بكتيريا ممرضة معزولة من نبات مصاب.

يحتوي الجينوم البكتيري على اندماج نسخي، حيث يقوم محفز جين منظم الضراوة أيضا بدفع التعبير عن جين بروتين فلوري غير مروج في المراحل القاضية.

أثناء الإصابة بالنبات، يؤدي تنشيط المحفز إلى تحفيز إنتاج البروتينات التنظيمية والفلورية.

يقوم البروتين المنظم بتنشيط جينات الضراوة، بينما يوفر الفلورة قراءة قابلة للقياس لتنشيط الضراوة.

قم بطرد الخلايا، ثم تخلص من الفائق، ثم أعد تعليقها للحصول على تعليق مركز.

ضع قطرة على غطاء الغطاء وغطها بشريط أغاروز لنشر الخلايا وتثبيتها.

التقاط صورة من مجال الضوء لتحديد جميع الخلايا البكتيرية، ثم صورة فلورية للكشف عن فلورة الخلية الواحدة.

ادمج كلاهما لرؤية فروق شدة الفلورة، التي تكشف عن مجموعات فرعية ذات تعبير جيني عالي أو منخفض أو معدوم.

يعكس هذا التنوع الظاهري استراتيجية تكيفية تعزز بقاء البكتيريا أثناء استعمار النباتات.

لتحليل الخلية الواحدة، حضر محلول أجاروز بنسبة 1.5٪ في ماء مقطر. بعد الذوبان، أضف كمية كافية من الحجم لملء الفراغ بين شريحتين مجهريتين موضوعتين جنبا إلى جنب وضع شريحة أخرى فوقها. دعهم يقودون لمدة 15 دقيقة وأزل الشريحة الموضوعة في الأعلى بحذر.

باستخدام شفرة، قم بقطع وسادة الأغاروز إلى قطع بحجم 5 ملم في 5 ملم قبل الاستخدام. جهاز طرد مركزي متوازي بسعة 1 ملليلتر من البكتيريا المستخرجة من الأبوبلاست. قم بإزالة