استخراج الحمض النووي الكلي من الأوراق لاكتشاف العدوى البكتيرية

ابدأ بقطع صغيرة من نسيج الأوراق المبردة حيث يصاب اللحاء بممرض بكتيريا.

ضع القطع في هاون يحتوي على النيتروجين السائل لتثبيط نشاط النوكلياز المتحلل للحمض النووي.

الطحن لاضطراب الخلايا ميكانيكيا وإطلاق المكونات داخل الخلية.

استخدم ملعقة مبردة لنقل المسحوق، أضف حاجز التحلل، ثم قم بتدوير التعليق.

يحتضن لتحليل نوى النباتات والخلايا البكتيرية، مطلقا الحمض النووي النووي والحمض النووي الريبي أثناء تغيير البروتينات.

أضف RNase وقم بالحضانة لتحليل الحمض النووي الريبي.

أضف محلول ترسيب البروتين إلى تجميع البروتينات، ثم جهاز الطرد المركزي لفصلها.

انقل المادة الفائقة التي تحتوي على الحمض النووي النباتي والبكتيريا إلى الأيزوبروبانول لترسيب الحمض النووي كخيوط شبيهة بالخيوط.

جهاز طرد مركزي لجمع الحمض النووي والتخلص من السوبرناتانت.

اغسله بالإيثانول، ثم استخدم الطرد المركزي، وتخلص من الفائق الفائق.

جفف الحمض النووي بالهواء، ثم أضف محلول إعادة ترطيب وحضنه لإذابته.

عينات الحمض النووي جاهزة الآن للكشف عن مسببات الأمراض المعتمدة على PCR لاحقا.

استخدم مقصا نظيفا لقطع ورقة طازجة كاملة من شجرة حمضيات، وضعه في كيس ساندويتش بلاستيكي نظيف. ثم قم بتبريد الهاون والمدقة بإضافة كمية صغيرة من النيتروجين السائل. بعد ذلك، استخدم المقص لقطع قطع صغيرة من نسيج الورقة، بحجم يقارب بوصة مربعة واحدة.

ضع قطع الأوراق في الهاون لتجميدها فورا. ابدأ بسرعة بطحن نسيج الورقة بالهاون حتى يتبخر النيتروجين السائل، ويبقى مسحوق أخضر ناعم. بعد ذلك، برد ملعقة معدنية في النيتروجين السائل لمدة 10 إلى 15 ثانية. ثم استخدم الملعقة الباردة لسحب الأنسجة الأرضية من الهاون في أنبوب طرد مركزي دقيق بسعة 1.5 ملليلتر. استخدم ماصة بسعة 1000 ميكرولتر لإضافة 600 ميكرولتر من محلول تحلل النوى إلى العينة. ثم قم بتدوير العينة لمدة ثانية إلى ثلاث ثوان. حضن الأنبوب عند درجة حرارة 65 درجة مئوية، في حمام مائي لمدة 15 دقيقة.

بعد انتهاء فترة الحضانة، استخدم ماصة بسعة 10 ميكرولتر لإضافة 3 ميكرولتر من محلول RNase إلى الليزات لإزالة RNA. ثم اخلط محتويات الأنبوب عن طريق قلبه مرتين إلى خمس مرات. حضن عند 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة في حاضنة الخزانة. بعد 15 دقيقة، أضف 200 ميكرولتر من محلول ترسيب البروتين إلى العينة. قم بتدوير الأنبوب بسرعة عالية لمدة 20 ثانية.

بعد ذلك، قم بالطرد المركزي للعينة عند 13000 جرام لمدة 3 دقائق. خلال عملية الطرد المركزي، أضف 600 ميكرولتر من الأيزوبروبانول محفوظا في درجة حرارة الغرفة إلى أنبوب طرد مركزي دقيق جديد بسعة 1.5 ملليلتر. بعد انتهاء الطرد المركزي، قم بإزالة المادة الفائقة بعناية من أنبوب الطرد المركزي إلى الأنبوب الذي يحتوي على الأيزوبروبانول. تخلص من الحبيبة.

اقلب الأنبوب ليكون الحمض النووي مرئيا مثل خيط يشبه الخيط. بعد ذلك، قم بعمل طرد مركزي على العينة عند 13000 جرام لمدة دقيقة في درجة حرارة الغرفة.

أخرج المادة الفائقة بعد الطرد المركزي. ثم أضف 600 ميكرولتر من الإيثانول بنسبة 70٪ إلى الحبيبة. اقلب الأنبوب عدة مرات لغسل الحبيبة. قم بجهاز الطرد المركزي في الأنبوب بقوة 13000 جرام لمدة دقيقة واحدة. بعد انتهاء الطرد المركزي، استنشق السوبرناتانت بحذر. ثم قلب الأنبوب مع فتح الغطاء على ورق ماص ليجف في الهواء لمدة 15 دقيقة. بعد التجفيف، أضف 100 ميكرولتر من محلول إعادة ترطيب الحمض النووي إلى الحبيبة. حضن تعليق الحمض النووي عند 65 درجة مئوية في حمام مائي لمدة ساعة.