تحضير المقاطع التجميدية لشبكية عين الفأر لتقييم نفاذية الشبكية للفيروس المرتبط بالغدة* (Adeno-Associated Virus)
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:54 دقيقة • August 31st, 2026
خذ عيناً مستأصلة من نموذج فأر يعاني من تعطل الحاجز الشبكي، ومحقونة مسبقاً بفيروس مرتبط بالأدنو (adeno-associated virus) يحمل جين البروتين الفلوري الأخضر.
يسمح اختلال الحاجز الشبكي للفيروس المرتبط بالغدّة (AAV) باختراق الخلايا المستقبلة للضوء، حيث يتم التعبير عن الجينوم الفيروسي لإنتاج البروتين الفلوري الأخضر (GFP)، مما يجعل الخلايا فلورية.
قم بتشريح العين لإزالة القرنية والعدسة، مع ترك كأس العين سليمًا.
اغمر كأس العين في محلول مثبت للحفاظ على بنية الشبكية.
انقل كأس العين بالتتابع عبر تركيزات متزايدة من محاليل الحماية من التجميد. لاحقاً، يتم التحضين في التركيز النهائي لمنع تكون بلورات الجليد.
قم بتضمين كأس العين في وسط تجميد (cryo-medium) ثم جمدها.
استخدم جهاز الميكروتوم المجمد (cryostat) لتقطيع كأس العين إلى شرائح رقيقة.
ثبّت المقطع على شريحة. أضف محلولاً منظماً يحتوي على منظفات لنفاذية الأنسجة، وذلك للسماح للأجسام المضادة بالوصول إليها أثناء عملية التصبيغ المناعي اللاحقة.
اشطف المقطع. ثم عامله بمحلول حجب لمنع التفاعلات غير النوعية للأجسام المضادة أثناء الصبغ المناعي.
أصبحت المقاطع التجميدية للشبكية جاهزة لإجراءات الصبغ المناعي الإضافية والتصوير الفلوري. وتكشف الخلايا الفلورية الموجبة لـ GFP عن نجاح التنحي الفيروسي، مما يشير إلى نفاذية الشبكية.
بعد استئصال العينين من حيوان محقون تم القضاء عل
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية