موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 4:12 دقيقة • August 31st, 2026
ابدأ باستخدام خلايا كبدية مستزرعة في طبق مغطى بالكولاجين.
أدخل كاشف ترانسفكشن (transfection reagent) مرتبطاً ببلازميدين: أحدهما يحمل جينوم فيروس التهاب الكبد B أو HBV معدلاً، والآخر يشفر البروتينات الهيكلية الفيروسية.
يتم التحضين للسماح بدخول البلازميد. وداخل الخلية، يتم التعبير عن الجينات الفيروسية لإنتاج البروتينات التركيبية وجينوم HBV معدل، والتي تتجمع لتكوين جزيئات HBV مأشوبة.
استبدل الوسط وباشر بالتحضين لدعم إنتاج الجسيمات الفيروسية وإطلاقها.
يتم جمع الوسط والقيام بالطرد المركزي لترسيب الحطام الخلوي.
اجمع السائل الطافي وقم بترشيحه لإزالة البقايا المتبقية.
بعد ذلك، أضف البولي إيثيلين جليكول وكلوريد الصوديوم لترسيب الجسيمات الفيروسية.
قم بالطرد المركزي لترسيب المحتويات. أذب الراسب في المحلول المنظم وقم بطرد الشوائب لأسفل. بعد ذلك، ضع المحلول فوق وسادة من السكروز.
أجرِ عملية الطرد المركزي الفائق لترسيب الجسيمات الفيروسية عبر الوسادة.
أزل الطافي وأعد تعليق الراسب في الوسط.
قم بترشيح المعلق وتخزين فيروس HBV المؤتلف المنقى في درجة حرارة منخفضة لاستخدامه في التحليلات اللاحقة.
بعد تحضير وسط استزراع الخلايا، وقبل عملية عفن الخلايا (transfection) بيوم واحد، يتم وضع 4 × 10⁶ من خلايا HepG2 في الوسط، داخل طبق بقطر 10 سم ومطلي بالكولاجين. تُحضن الخلايا عند درجة حرارة 37 درجة مئوية في حاضنة رطبة تحتوي
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية