إسكات الجينات بوساطة فيروس دينسوفيروس المؤتلف في يرقات البعوض

خذ يرقات بعوض في طور مبكر، تكون عرضة للإصابة بالفيروس.

انقل اليرقات إلى دورق يحتوي على ماء منزوع الأيونات.

قم بإدخال فيروس الدينسوفيروس المؤتلف، المصمم لترميز microRNA يثبط جينات اليرقات المستهدفة. ثم قم بالتحضين.

تمتص اليرقات الفيروس، الذي يصل بعد ذلك إلى الأمعاء.

يعبر الفيروس الذي تم ابتلاعه ظهارة الأمعاء وينتشر إلى الأنسجة الأخرى.

يدخل الفيروس إلى خلايا اليرقات عبر عملية الالتقام الخلوي ويطلق حمضه النووي DNA في النواة.

ينتج الحمض النووي الفيروسي microRNAs.

في السيتوبلازم، ترتبط هذه الـ microRNAs بمعقد إسكات الحمض النووي الريبي المستحث.

يرتبط المعقد بجزيئات mRNA المستهدفة والمكملة في اليرقات ويقوم بشطرها، مما يمنع التعبير الجيني ويؤدي إلى إسكات الجينات.

بعد فترة الحضن، اغسل اليرقات بالماء منزوع الأيونات لإزالة الجسيمات الفيروسية غير المبتلعة.

انقل اليرقات إلى طبق جديد يحتوي على الغذاء من أجل التعافي.

أصبحت يرقات البعوض المصابة بالفيروس، مع إسكات الجين المستهدف، جاهزة للتطبيقات اللاحقة.

اغسل 10 يرقّة من A. albopictus CHANNEL_ID_REMOVED في طورها الأول ثلاث مرات، باستخدام الماء منزوع الأيونات. ثم انقل اليرقات إلى دورق يحتوي على 95 milliliters من الماء منزوع الأيونات.

أضف 5 mL من مخزونات rAaeDV، واحضن اليرقات لمدة 24 ساعة عند 28 °C. لضمان نجاح عدوى اليرقات، من الضروري أن تبقى اليرقات مع جزيئات الفيروس المعدية لمدة تتراوح بين 24 إلى 36 ساعة لضمان تحقيق نسب عدوى عالية. بعد فترة الحضن، اغسل اليرقات ثلاث مرات باستخدام الماء منزوع الأيونات، ثم انقل اليرقات مرة أخرى إلى الأطباق. قم بتغذية اليرقات بانتظام.