تصوير القفيصات الفيروسية المعالجة حرارياً باستخدام المجهر الإلكتروني النافذ

خذ الأنابيب التي تحتوي على القفيصات الفيروسية، وهي جسيمات شبيهة بالفيروسات تفتقر إلى المادة الوراثية.

سخن الأنابيب عند درجة حرارة ثابتة لمدد زمنية متفاوتة.

تؤدي فترة التسخين القصيرة إلى إجهاد طفيف لبروتينات القفيصة، بينما يؤدي التسخين المطول إلى تفكك القفيصة وتسبب التجمعات.

برد الأنابيب بسرعة لمنع حدوث المزيد من التغيرات الهيكلية.

انقل السائل إلى غشاء بارافين.

ضع شبكة المجهر الإلكتروني النافذ (TEM) فوق القطرة. تلتصق الكابسيدات بسطح الشبكة.

جفف الشبكة باستخدام ورقة ترشيح لإزالة السائل الزائد.

اغسل باستخدام محلول منظم لإزالة القفيصات المرتبطة بشكل ضعيف، ثم جفف الشبكة مرة أخرى بالترشيح.

اغمرها في أسيتات اليورانيل، وهي صبغة معدنية ثقيلة ترتبط بسطح القفيصة، مما يجعلها تظهر بلون داكن تحت المجهر الإلكتروني النافذ TEM.

جفف الشبكة بقطعة من ورق الترشيح وضعها على طبق. احفظ الطبق في مجفف لإزالة الرطوبة.

قم بتصوير الشبكة باستخدام TEM لتصور التلف الذي أصاب الكابسيد والناتج عن الحرارة.

قم بإجراء المعالجة الحرارية كما سبق، باستثناء استبدال 10 millimolar HEPES، pH 7.4 بمحلول PBS، وعدم تخفيف الكابسيدات بشكل إضافي بعد المعالجة. بعد ذلك، قم بنقل قطرة كاملة بحجم 15 microliter من محلول الكابسيد المعالج إلى فيلم البارافين باستخدام الماصة. أمسك حافة الشبكة بالملقط مع السماح له بالإغلاق على الحافة لتثبيت الشبكة، ثم ض