Measuring Hepatitis C Viral Load Using Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction

JoVE Encyclopedia of Experiments

علم الأحياء الدقيقة

0 مشاهدات • 2:27 د • July 31st, 2026

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Begin with total cellular RNA containing Hepatitis C virus or HCV RNA.
Take the known copies of HCV RNA as a standard.
Add a buffer containing reverse transcriptase, DNA building blocks, HCV-specific primers, and initiate reverse transcription to synthesize complementary DNA or cDNA. The viral RNA is degraded afterward.
Add a buffer containing HCV-specific primers, DNA polymerase, DNA building blocks, and a fluorescent dye.
Initiate quantitative PCR thermal cycling.
The primer and DNA polymerase bind to single-stranded DNA and synthesize double-stranded DNA or dsDNA.
The dye binds to the dsDNA, producing a detectable fluorescence signal.
Later, heating separates the DNA strands, cooling allows primer binding, and new double-stranded DNA is synthesized.
As cycles repeat, dsDNA copies increase exponentially, producing higher dye fluorescence.
Compared with the standard, an early fluorescence rise indicates high viral load, while a delayed rise indicates low viral load in the infected cells.

Reverse transcribe one microgram of total cellular RNA using reverse transcriptase enzyme and a specific primer for the HCV sense strand that binds to the five prime untranslated region in a 0.2 milliliter tube. Also, reverse transcribe F-N-X-H-C-V-R-N-A of known genome copies using an HCV sense strand primer using a real-time PCR system.

Carry out QPCR by using 50 nanograms of the resulting transcribed cDNA using specific HCV primers and DNA binding green dye containing QPCR super mix. Use the following conditions when running QPCR to determine the H-C-V-R-N-A copy number

09:53

نموذج في المختبر لدراسة التحول الخلوي من هربس كابوزي ساركوما

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

04:41

Plaqueing من فيروسات الهربس البسيط

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

07:10

إنشاء وقياس العدوى اللايتية بدي نوفو بواسطة فيروس الهربس المرتبط بساركوما كابوسي الخالي من الخلايا

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

13:58

تضخيم وقياس HIV - 1 الحمض النووي الريبي في الأفراد المصابين بالايدز مع الأحمال الفيروسية أقل من الحد كشفها بواسطة فحوصات السريرية القياسية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:26

Reverse Transcriptase Activity as a Marker for Virus-Like Particle Production

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

04:08

PCR للنسخ العكسي الكمي في الوقت الحقيقي لتشخيص الالتهابات الفيروسية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

13:04

بروتوكول لتحليل التهاب الكبد الوبائي فيروس النسخ المتماثل

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:35

تطوير نظام الفيروسات مراسل التهاب الكبد B لرصد المراحل المبكرة من دورة النسخ المتماثل

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:14

الكشف عن نسخة منخفضة العدد الحمض النووي الفيروسي المتكاملة التي شكلتها في المختبر عدوى التهاب الكبد باء

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:25

الثقافات "الكبد على رقاقة" خلايا الكبد الأولية وخلايا كوبفر للعدوى بفيروس التهاب الكبد B

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 22 أغسطس 2026