التصوير الفلوري المتعدد للأحماض النووية الفيروسية والبروتينات في الخلايا اللمفاوية البشرية المصابة

ابدأ باستخدام لمفاويات بشرية مصابة بفيروس HIV-1 على غطاء شريحة مثبت على شريحة.

تم تهجين هذه الخلايا باستخدام مسابير تعمل على وسم RNA الفيروسي وDNA ما قبل الفيروسي فلورياً.

قم بتحضين الخلايا في محلول حجب لمنع الارتباط غير النوعي للأجسام المضادة.

أضف الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف بروتين القفيصة لفيروس HIV-1.

يتم التحضين للسماح للأجسام المضادة الأولية بالارتباط ببروتين القفيصة.

اغسل الخلايا باستخدام المحلول المنظم لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.

أضف أجساماً مضادة ثانوية مُوسومة فلورياً ترتبط بالأجسام المضادة الأولية.

اغسل الأجسام المضادة غير المرتبطة.

أضف صبغة متخصصة بالـ DNA لصبغ نوى الخلايا، ثم اغسل لإزالة الصبغة الزائدة.

استخدم التصوير الفلوري المتعدد للكشف المتزامن عن الحمض النووي الفيروسي DNA، والحمض النووي الريبي RNA، والبروتين، ونوى المضيف بألوان متميزة.

يتيح هذا التصوير المرئي للخلية الواحدة دراسة المراحل المختلفة لدورة حياة الفيروس من خلال التصوير المتزامن للحمض النووي الفيروسي DNA، والحمض النووي الريبوزي RNA، والبروتينات في الخلايا المصابة.

لإجراء الصبغ المناعي للبروتينات المستهدفة، وبعد عملية الغسل الأخيرة، تُعامل كل شريحة غطاء بـ 200 microliters من محلول الحجب لمدة ساعة واحدة من التحضين في درجة حرارة الغرفة.

في نهاية فترة الحضن، قم بتصريف محلول الحجب وأضف 200 µL من الأجسام المضادة الأولية المطلوبة والمخففة في محلول PBS plus Tween 20 المضاف إليه 1% bovine serum albumin. بعد الحضن لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة، اغسل الشرائح مرتين لمدة 10 دقائق في كل مرة باستخدام محلول PBS plus Tween 20 جديد مع الرج في كل غسلة، قبل وسم العينات باستخدام جسم مضاد ثانوي مناسب لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. في نهاية فترة الحضن، اغسل الشرائح مرتين باستخدام محلول PBS plus Tween 20 جديد لمدة 10 دقائق مع الرج في كل غسلة.

بعد الغسلة الثانية، قم بصبغ النوى بصبغة نووية مناسبة لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة، يتبع ذلك غسل الشريحة مرتين باستخدام PBS لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مع الرج.