تنقية أجسام الإنتاسوم للفيروس الرغوي النموذجي بواسطة كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي

ابدأ بمعلق يحتوي على رواسب من الـ intasomes الخاصة بالفيروس الرغوي النموذجي (PFV)، والإنتغريزات أحادية القسيمة (monomeric integrases)، وقليلات السكر من الحمض النووي (DNA oligomers)، وتجمعات بروتينية.

إن الـ PFV intasomes هي رباعيات من إنزيمات التكامل الفيروسية المرتبطة بأوليغومرات اصطناعية تحاكي الحمض النووي الجينومي الفيروسي.

أضف محلول ملحي إلى المعلق واحضه على الثلج. حيث يقلل الملح من التفاعل الكهروسكوني بين الإنتاسومات، مما يسمح بإذابة الرواسب.

قم بالماصة بلطف على فترات زمنية منتظمة لتعزيز إذابة الـ intasome.

قم بإجراء عملية الطرد المركزي لترسيب ما تبقى من الراسب، واجمع السائل الطافي الذي يحتوي على الإنتاسومات الذائبة.

استخدم عمود كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي الذي تم موازنته مسبقاً والمعبأ بحبيبات الأغاروز المتشابكة، ثم قم بتحميل الطافي على العمود.

نظراً لحجمها الكبير، تتجاوز التجمعات البروتينية والإنتازومات مسام الخرزات وتخرج من العمود في وقت مبكر.

تدخل الإنتيجريزات أحادية القسيمة والأوليغومرات الأصغر حجماً في مسام الخرز وتخرج في وقت لاحق.

اجمع الكسور التي تخرج مبكرًا والتي تحتوي على الـ intasomes لإجراء المزيد من التحليلات اللاحقة.

قم بتجهيز طرفي ماصة ذات فتحة واسعة عن طريق إزالة من 2 إلى 4 ملم من نهاية طرف ماصة سعة 20 µL باستخدام شفرة حلاقة أو مشرط جديد على سطح نظيف. أخرج أنبوب الدي