موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:52 دقيقة • August 31st, 2026
ابدأ بمزرعة من خلايا سرطان الكبد البشرية التي تم نقل RNA فيروس التهاب الكبد E (HEV) إليها لإنتاج الجسيمات الفيروسية.
تكتسب بعض فيروسات HEVs غشاءً إندوسومياً مشتقاً من المضيف وتخرج من الخلية، بينما تظل فيروسات أخرى داخل الخلية كفيروسات HEVs غير مغلفة.
لحصد فيروسات HEV خارج الخلوية، يتم جمع وترشيح المادة الطافية للمزرعة لإزالة الحطام الخلوي.
يُخزن في درجة حرارة منخفضة للغاية للحفاظ على القدرة الإعدائية.
لحصاد جزيئات HEVs داخل الخلايا، اغسل الخلايا بمحلول منظم.
أضف trypsin-EDTA لفصل الخلايا، ثم أضف وسطاً غذائياً لإيقاف النشاط الإنزيمي.
انقل المعلق إلى أنبوب وقم بإجراء عملية الطرد المركزي.
تخلص من الطافي الذي يحتوي على بقايا التريبسين. أعد تعليق الراسب وانقله إلى أنبوب.
جمّد الخلايا في النيتروجين السائل ثم قم بإذابتها على الثلج.
كرر دورات التجميد والإذابة لتحليل الخلايا، مما يؤدي إلى تحرير الفيروسات.
قم بإجراء الطرد المركزي، ثم اجمع الطافي الذي يحتوي على الفيروسات، وخزنه في درجة حرارة منخفضة للغاية.
في اليوم السادس، قم بترشيح السائل الطافي عبر غشاء بمسامية 0.45 micrometer لإزالة أي حطام خلوي، ثم خزن فيروس التهاب الكبد E المستخلص من المزرعة الخلوية والموجود خارج الخلايا عند درجة حرارة 4 degrees Celsius. ولحصد جزيئات فيروس التهاب الكبد E الموجودة داخل المزرعة الخلوية، اغسل الخلايا بمحلول PBS وقم بف
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية