إعادة برمجة خلايا الدم البشرية إلى خلايا جذعية مستحثة متعددة القدرات بوساطة فيروس سينداي

خذ مستنبتًا من الخلايا أحادية النواة في الدم المحيطي البشري (PBMCs).

أضف فيروس Sendai الذي يشفر عوامل نسخ إعادة البرمجة. قم بتغطية الطبق وإغلاقه بإحكام.

قم بإجراء الطرد المركزي لتعزيز التلامس بين الفيروس والخلايا، ثم قم بالتحضين.

بعد اندماج الفيروس، يقوم الحمض النووي الريبي (RNA) الفيروسي بالتعبير عن عوامل نسخ تعمل على تنشيط جينات تعدد القدرات الخلوية وتثبيط الجينات المحددة للسلالات لبدء عملية إعادة البرمجة.

خلال هذه الفترة، تتحول مجموعة فرعية من خلايا PBMCs المنقولة إلى خلايا جذعية مستحثة متعددة القدرات (iPSCs) وتعبر عن بروتينات الالتصاق.

انقلها إلى بئر مطلي بمصفوفة (matrix) وقم بطرد الخلايا مركزياً. استبدل الطافي بوسط نمو.

عند الحضن، تلتصق الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات (iPSCs) بالمصفوفة، بينما تظل الخلايا أحادية النواة في الدم المحيطية (PBMCs) المنقولة وغير الملتصقة معلقة.

انقل المعلق إلى بئر مطلية وقم بالطرد المركزي. أضف الوسط إلى البئر الأصلية واحضن كليهما.

تبدأ الخلايا أحادية النواة في الدم المحيطي (PBMCs) المنقولة المتبقية عملية إعادة البرمجة، وتتحول إلى خلايا جذعية مستحثة متعددة القدرات (iPSCs)، ثم تلتصق. تزيد هذه الخطوة من أقصى قدر من الاحتفاظ بالخلايا المعاد برمجتها.

استبدل الوسط يومياً لدعم نمو iPSC.

في هذا الإجراء، يتم نقل خلايا الدم إلى أنبوب مخروطي سعة 15 مللتر، وعدّها