تحليل استدخال فيروس الإنفلونزا باستخدام مقايسة حجب الستريبتاديفين

ابدأ بأنابيب تحتوي على خلايا ظهارية رئوية بشرية.

أضف فيروسات الإنفلونزا المبيوتنة (biotinylated) واحضنها على الثلج. ترتبط الفيروسات بسطح الخلية دون أن يتم إدخالها إلى الداخل.

قم بإجراء عملية الطرد المركزي لفصل الخلايا المرتبطة بالفيروس، ثم تخلص من supernatant وأعد تعليق الخلايا.

في أنبوب النقطة الزمنية الأولية، أضف الستريبتاديفين غير المسمى، الذي يرتبط بالفيروسات المبيوتنة، مكوناً معقدات.

أضف الستريبتفيدين المسمى بفلوروفور، والذي لا يرتبط بمعقد الستريبتفيدين-بيوتين الفيروسي. اغسل الخلايا ثم قم بتثبيتها.

قم بتحضين أنبوب النقطة الزمنية اللاحقة عند درجة حرارة أعلى، مما يسمح بدخول الفيروس إلى داخل الخلايا، ثم أعده إلى الثلج.

أضف الستربتافيدين غير المسمى وعاملاً مانعاً للابتلاع الخلوي، والذي يمنع المزيد من امتصاص الفيروس، ثم قم بالتحضين. يرتبط الستربتافيدين بالفيروسات المبيوتنة المرتبطة بالسطح، ثم قم بالغسل.

قم بتثبيت الخلايا وأضف محلولاً منظماً يحتوي على منظف لجعلها نفاذة.

اغسل ثم أضف streptavidin المسمى بفلوروفور، والذي يدخل إلى الخلايا ويرتبط بـ biotin.

قم بتحليل العينات باستخدام قياس التدفق الخلوي.

يؤكد ارتفاع الفلورة في النقطة الزمنية اللاحقة نجاح عملية الإدخال الخلوي للفيروس.

بعد تكرار عملية الغسيل مرة أخرى، قم بتبريد الأنابيب على الثلج لمدة 10 دقائق. وعندما تبرد الأنابيب، قم بالطرد المركزي