تقييم تثبيط النمو البكتيري بوساطة العاثيات باستخدام قياسات الكثافة الضوئية

ابدأ باستخدام لوح متعدد الآبار يحتوي على معلق عاثيات مخفف تسلسلياً في مرق غني بالمغذيات كمجموعة علاج، ومرق خالٍ من العاثيات كمجموعة ضابطة.

أضف E. coli إلى كل بئر. وباستخدام مقياس الطيف الضوئي، قم بقياس الكثافة الضوئية (OD) المرجعية لتسجيل التركيز البكتيري الأولي.

بعد ذلك، قم بتحضين الطبق للسماح بنمو البكتيريا وإصابتها بالعاثيات.

في مجموعة الضبط، تستهلك البكتيريا العناصر الغذائية وتتكاثر، مما يؤدي إلى زيادة قيمة OD.

في مرحلة المعالجة، ترتبط العاثيات بمستقبلات سطح البكتيريا وتحقن جينوماتها في السيتوبلازم.

باستخدام آليات الخلية المضيفة، يتضاعف الجينوم الفيروسي وينتج بروتينات فيروسية، والتي تتجمع لتكوين جسيمات فيروسية جديدة. تقوم هذه الجسيمات بتحليل الخلية، مما يؤدي إلى إطلاق النسل الفيروسي.

قم بقياس الكثافة الضوئية OD على فترات زمنية محددة لمقارنة النمو البكتيري.

تظهر آبار التحكم زيادة تدريجية في OD، بينما تظهر الآبار المعالجة بالعاثيات قيم OD أقل، مع انخفاضات أكبر عند التركيزات الأعلى من العاثيات.

يساعد هذا في تحديد تركيز العاثيات المطلوب لتحقيق أقصى تثبيط لنمو البكتيريا.

للبدء، يتم إعداد مقايسة الصفيحة الدقيقة باستخدام رؤوس ماصات مرشحة لتجنب التلوث الخلطي. أولاً، أضف 180 µL من mTSB في آبار الأعمدة من 1 إلى 12 في الصفيحة الدقيقة ذات الـ 96 بئراً. ثم قم بإعداد تخفيفات عشرية متسلسلة لكل عاثية ف