عزل البروتينات من معقدات الحمض النووي الفيروسي والبروتين

خذ نويّات الخلايا التي تحتوي على الجينومات الفيروسية، والموسومة بنيوكليوتيدات معدلة بالألكاين.

قم بتعليق النوى في خليط من البيوتين-أزيد وأيونات النحاس، ثم حضنها.

يساعد أيون النحاس في الربط التساهمي بين مجموعة الأزيد ومجموعة الألكاين.

قم بإجراء الطرد المركزي وتخلص من السائل الطافي.

أعد التعليق في المحلول المنظم، ثم انقل المزيج، وقم بالطرد المركزي لترسيب الراسب.

قم بالتجميد السريع، ثم إذابة الكتلة المترسبة للمساعدة في عملية التحلل.

أعد تعليق العينات واستخدم الموجات فوق الصوتية لتحليل النوى.

قم بإجراء الطرد المركزي وجمع الطافي الذي يحتوي على معقدات البروتين والحمض النووي الفيروسي.

قم بترشيح السائل الطافي لإزالة الملوثات.

قم بتخفيف الرشاحة.

أضف حبيبات مغناطيسية مغلفة بالستربتافيدين وحضن الخليط لتسهيل الارتباط بمعقدات البروتين-DNA المبيوتنة.

قم بتطبيق مجال مغناطيسي لتجميع الخرزات، ثم اغسلها لإزالة الملوثات.

كرر عملية الغسيل.

أضف محلول الاستخلاص وقم بالتسخين لفصل البروتينات ومسخ طبيعتها.

افصل الخرزات، واجمع السائل المستخلص.

قم بالتجميد السريع للبروتينات المعزولة. تُحفظ في درجات حرارة فائقة الانخفاض لإجراء المزيد من التحليلات.

بعد إزالة PBS تماماً، أعِد تعليق الراسب النووي في 10 milliliters من خليط تفاعل click، عن طريق السحب والضخ برفق باستخدام ماصة سعة 10 milliliter لخمس مرات. قم بتدوير العينة لمدة ساعة