عزل الفيروسات الداخلية من ذباب Drosophila البري باستخدام خطوط خلوية مُهندسة ومستقبلة
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 1:32 دقيقة • October 29th, 2026
ابدأ بأنبوب يحتوي على ذباب Drosophila بالغ ومخدر من نفس الجنس والنوع.
أضف محلولاً منظماً ثم قم بعملية التجانس لتحرير المجموعات الفيروسية والبكتيرية الداخلية.
قم بطرد المتجانس مركزيًا، ثم مرر السائل الطافي عبر غشاء عن طريق الطرد المركزي لإزالة البكتيريا والحطام.
انقل الراشح إلى طبق متعدد الآبار يحتوي على مستنبتات خلايا Drosophila معدلة وراثياً تكون قابلة للإصابة بفيروسات RNA، ثم قم بالتحضين.
تدخل الفيروسات إلى الخلية المضيفة عن طريق الالتقام الخلوي بوساطة المستقبلات.
بمجرد وصوله إلى الداخل، يتكاثر الجينوم الفيروسي، مما ينتج وسائط من الحمض النووي الريبوزي مزدوج السلسلة (dsRNA) .
تُعبر الخلايا المضيفة عن بروتين كابت يرتبط بـ dsRNA، مما يمنع تحلله بواسطة Dicer، وهو إنزيم الدفاع في الخلية المضيفة.
يسمح ذلك بتخليق الحمض النووي الريبوزي الفيروسي وإنتاج البروتين الفيروسي، مما يعزز التكاثر الفيروسي والتضخيم.
تؤدي الأحمال الفيروسية العالية إلى إعاقة نمو الخلايا المضيفة وتسبب آثاراً اعتلالية خلوية.
قم بطرد الطبق مركزياً لفترة وجيزة.
اجمع الطافي الذي يحتوي على المجموعات الفيروسية واحفظه في درجة حرارة منخفضة من أجل التحليلات اللاحقة.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية