موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 4:35 دقيقة • August 31st, 2026
ابدأ باستخدام خلايا ثديية مصابة بفيروس غدي.
قم بإجراء دورات متكررة من التجميد والإذابة لتحليل الخلايا وتحرير الفيريونات.
قم بطرد المستخلص مركزياً لترسيب الحطام. اجمع الراشح الذي يحتوي على الجسيمات الفيروسية.
ضع الطافي الفيروسي فوق تدرج كلوريد السيزيوم المتدرج للفصل بناءً على الكثافة.
جهاز طرد مركزي فائق للسماح للجسيمات الفيروسية بالهجرة وفقاً لكثافاتها الطافية.
تكون الفيريونات السليمة التي تحتوي على الجينوم الفيروسي الغددي الكامل أكثر كثافة بسبب الحمض النووي DNA المعبأ، لذا فهي تترسب في حزمة سفلية، بينما تظل القفيصات الفارغة والأخلاط الأخف وزناً في الطبقات العليا.
قم بإزالة الطبقات العليا. ثم اجمع النطاق السفلي من الفيريونات المحتوية على الجينوم.
أعد تعليق الفيريونات في كلوريد السيزيوم ذي الكثافة الموحدة ثم قم بإجراء الطرد المركزي الفائق مرة أخرى لتحسين عملية الفصل وتركيز الجسيمات الكاملة.
تخلص من الطبقات العليا واستخلص النطاق السفلي.
قم بإجراء الديلزة للعينة لإزالة كلوريد السيزيوم.
أصبحت النواقل الغدية عالية النقاء والمحتوية على الجينوم الآن جاهزة للتطبيقات اللاحقة.
لتحضير محلل الفيروس من أجل التنقية باستخدام تدرج كلوريد السيزيوم، قم بتجميد وإذابة معلق الخلايا الفيروسي أربع مرات. بعد ذلك، قم بطرد محلل الفيروس مركزياً عند 500 ×g لمدة ثماني دقائق في درجة حرارة الغرفة.
بعد ذلك، اجمع الطافي الذي
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية