موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:08 دقيقة • August 31st, 2026
ابدأ بنظام مفاعل حيوي يحتوي على سِقالة كبد جرذ منزوعة الخلايا تمت إعادة استعمارها بخلايا كبد بشرية.
يتم الحفاظ على السقالة في نظام تدفق يعمل على تدوير الوسط الغذائي لتوفير العناصر المغذية.
املأ محقنة بمحلول منظم يحتوي على ناقل فيروسي مرتبط بالغدة (AAV) معاد التركيب.
يحمل الناقل DNA ذاتي التكامل مع كاسيت جين منقول يشفر مراسلاً فلورياً وRNA لإسكات الجينات.
أوقف تدفق الوسط وافصل أنبوب التدفق الداخل.
احقن الناقل عبر الوعاء الدموي الرئيسي الذي يغذي السقالة.
يتم التحضين للسماح بالتفاعل بين الناقل والخلية.
يدخل الناقل إلى خلايا الكبد عن طريق الالتقام الخلوي بوساطة المستقبلات.
بمجرد دخوله، يهرب الناقل من الإندوسوم ويطلق حمضه النووي DNA ذاتي المكمل في النواة.
يسمح الحمض النووي ذاتي المكمل بالتعبير المباشر عن الجين المنقول، مما ينتج بروتيناً فلورياً وحمضاً نووياً ريبوزياً مثبطاً للجينات.
استأنف تدفق الوسائط تدريجياً لاستعادة الدورة الدموية عبر السقالة.
أصبح نموذج الكبد الذي تم نقل الجينات إليه الآن مناسباً للتحليلات اللاحقة.
قم الآن بإجراء عملية ترانسدكشن لنموذج الكبد. أولاً، جهز 27 تريليون ناقل في 5 ml من PBS داخل سرنجة. يمكن إضافة Phenol red بتركيز 5 µg/ml.
ثم افصل الكبد عن دائرة الوسط الغذائي واحقن النواقل في النظام. وبمجرد الحقن، قم بتحضين النظام لمدة ساعة واحدة دون ضخ. بعد ذلك، قم بزيادة التدفق تدريجياً كما تم وصفه سابقاً.
لاحقاً، أثناء تحضين الكبد المنقول إليه الفيروس لمدة ستة أيام، يتم تغيير 50 milliliters من الوسط كل يومين.