النمو الفيروسي في خلايا الظهارة الأنفية البشرية المستزرعة عند الواجهة الهواء-سائل

ابدأ باستخدام خلايا ظهارية أنفية بشرية مغطاة بالمخاط، مُستنبتة على إدراج transwell في طبق متعدد الآبار.

يتلامس الجانب القاعدي للمستنبت مع الوسط، بينما يتعرض السطح القمي للهواء، مما يحاكي الواجهة بين الهواء والسائل في التجويف الأنفي.

اغسل المزرعة بالمحلول المنظم لإزالة طبقة المخاط.

أضف فيروس كورونا، المعلق في وسط خالٍ من المصل، إلى المزرعة.

حضّن الطبق مع تحريكه من حين لآخر لضمان امتزاز الفيروس.

قم بإزالة اللقاح الفيروسي والغسل بالمحلول المنظم لإزالة الفيروسات غير المرتبطة.

أخرج insert وقم بتعبئة البئر بوسط غذائي جديد.

حضن الطبق للسماح بحدوث العدوى الفيروسية.

يرتبط فيروس كورونا بمستقبلات سطح الخلية، ويدخل عن طريق الالتقام الخلوي، ثم يطلق جينومه في السيتوبلازم.

يتضاعف الجينوم الفيروسي وينتج بروتينات تتجمع لتكوين فيروسات جديدة.

تتحرر الفيروسات الجديدة من السطح القمي، وتنتشر لإصابة الخلايا المجاورة، مما يؤدي إلى تضخيم النمو الفيروسي.

قم بزراعة وتمييز مستنبتات الواجهة الهوائية السائلة (ALI) للأنف في أجهزة transwells التي تحتوي على حجرة قاعدية وأخرى قمة. قم بتوسيع الخلايا الجيبية الأنفية البشرية المفككة تحت ظروف الغمر، وبعد ذلك، قم بإزالة الوسط من الحجرة القمة للسماح بتمييز المستنبتات في واجهة هوائية سائلة.

في اليوم السابق للعدوى، اغسل مزارع ALI قمياً باستخدام المحلول الملحي الموقوف بالفوسفات (PBS).