موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 3:51 دقيقة • August 31st, 2026
استخدم ناقلات فيروسية بطيئة (lentiviral vectors) تحتوي على مستضد HIV-1 p24، وهو بروتين مؤشر يُستخدم للكشف.
أضف مادة منظفة لتحلل وتحرر p24، ثم قم بتخفيف العينة تسلسلياً.
استخدم لوحة ميكروية مطلية بأجسام مضادة أحادية النسيلة ضد p24 وعامل حجب لمنع الارتباط غير النوعي.
أضف تخفيفات العينات ومعايير p24 كمرجعيات.
يتم التحضين للسماح بتفاعل p24 مع الأجسام المضادة عبر إبيتوپ محدد، ثم تُزال المكونات غير المرتبطة.
يُحضن باستخدام أجسام مضادة متعددة النسائل لـ anti-p24 ترتبط بمواقع إيبيتوب مختلفة على p24. ثم تُزال أي أجسام مضادة غير مرتبطة.
أضف الأجسام المضادة المرتبطة بإنزيم البيروكسيديز والتي ترتبط بالأجسام المضادة متعددة النسيلة. ثم تخلص من الأجسام المضادة غير المرتبطة.
أضف ركيزة بيروكسيداز تتحول إلى منتج ملون.
أضف حمضاً لإيقاف نشاط البيروكسيديز وتثبيت الناتج.
قس الامتصاصية المقابلة لكثافة اللون، والتي تتناسب طردياً مع تركيز p24.
قم بإنشاء الرسم البياني القياسي وتقدير تركيزات العينات لتحديد العيار الفيروسي.
قم بتغطية لوحة ذات 96 بئراً عالية الارتباط بـ 10 µL من الأجسام المضادة أحادية النسيلة anti-p24 بتخفيف 1:150 وفقاً لبرنامج لقاح الإيدز التابع للمعاهد الوطنية للصحة (NIH) الخاص بطقم مقايسة التقاط مستضد HIV-1 p24. قم بتحضين اللوحة طوال الليل عند 4 °C. وفي اليوم التالي، اغسل اللوحة ثلاث مرات باستخدام 20
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية