موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 5:56 دقيقة • August 31st, 2026
ابدأ بمحلول تحلل خلوي يحتوي على DNA خلوي متجمع مع البروتينات الخلوية والجسيمات الفيروسية.
أضف أيونات المغنيسيوم، متبوعة بإنزيم النيوكليز، لتنشيط التحلل الإنزيمي للحمض النووي الخلوي وتفكيك تجمعات الحمض النووي والبروتين.
قم بالطرد المركزي لفصل الحطام وجمع السائل الطافي الذي يحتوي على الجسيمات الفيروسية.
ضع السائل الطافي فوق تدرج iodixanol غير متصل تزداد تركيزاته من الأعلى إلى الأسفل، ثم املأ الأنبوب بالمحلول المنظم.
جهاز طرد مركزي فائق لفصل المكونات بناءً على الكثافة. تتراكم الجسيمات الفيروسية عند السطح الفاصل بين الطبقتين ذاتي الكثافة العالية والمتوسطة.
أدخل إبرة عند هذه الواجهة واجمع الجسيمات الفيروسية في أنبوب.
أضف محلولاً منظماً يحتوي على مكونات تثبيت، مما يمنع تكتل الجسيمات الفيروسية.
ثم انقل المحلول إلى أنبوب يحتوي على مرشح غشائي.
قم بإجراء الطرد المركزي لتركيز الجسيمات الفيروسية فوق المرشح.
أضف المنظم المكمل بعامل التثبيت ثم قم بالطرد المركزي مجددًا للحصول على جسيمات فيروسية منقاة.
لجمع الخلايا المنقولة، قم بفصل الخلايا وتعليقها باستخدام وسط الزرع عن طريق السحب والتفريغ بالماصة. ثم انقل معلقات الخلايا إلى أنابيب معقمة سعة 50-milliliter. قم بطرد الخلايا مركزياً عند 500 times g لمدة خمس دقائق.
بعد ذلك، أضف خمسة ملليلتر من PBS إلى كل أنبوب وأعد تعليق رواسب الخلايا قبل دمج جميع المعلقات في أ
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية