موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 4:23 دقيقة • August 31st, 2026
ابدأ بشريحة تحتوي على خلايا مضيفة مصابة بالفيروس ونفوذة، حيث تتوزع الرنا الفيروسية (viral RNAs) بين الحيزين النووي والسيتوبلازمي.
أضف محلولاً منظماً لما قبل التهجين واتركه في حضانة تحت ظروف رطبة.
في المحلول المنظم، تعمل كواشف الحجب على سد مواقع الارتباط غير النوعية، بينما تعمل مثبطات RNase على تعطيل إنزيمات RNases والحفاظ على سلامة RNA.
أزل المحلول المنظم وأضف مجسات قليلة النوكليوتيدات ذات علامة ديجوكسيجين ممسوخة ومكملة للحمض النووي الريبي الفيروسي (viral RNA).
يُحضن في الظلام للسماح بتهجين المسبار مع الـ RNA، ثم يُغسل بشكل متكرر.
أضف مادة مثبتة لاستقرار هجائن المسبار-RNA، ثم اغسل العينات بشكل متكرر. أضف محلولاً منظماً مدعوماً بمنظف للحفاظ على نفاذية الخلايا.
أضف جسماً مضاداً لـ digoxigenin مقترناً بفلوروفور أخضر يتفاعل مع digoxigenin، ثم اغسل عدة مرات.
قم بتثبيت الخلايا للحفاظ على المعقدات، ثم اغسلها مرة أخرى.
أضف صبغة مرتبطة بالـ DNA لتلوين النوى. اغسل الصبغة الزائدة بشكل متكرر.
قم بالتثبيت باستخدام شريحة غطاء وإغلاقها بإحكام.
باستخدام مجهر كنفوكال، قم بتصوير الفلورة الخضراء، والتي تعكس توزيع الـ RNA الفيروسي بين نواة الخلية المضيفة والسيتوبلازم.
بعد إجراء ثلاث غسلات بمحلول PBS كما هو موضح، قم بتثبيت العينات مرة أخرى في 4% formaldehyde في PBS لمدة 10-15 دقيقة قبل القيام بعملية نفاذية ثانية
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية