موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 2:06 دقيقة • August 31st, 2026
ابدأ باستخدام غرفة خلايا متعددة الطبقات تحتوي على خلايا ثديية منقولة تنتج ناقلات الفيروس المرتبط بالغدة (adeno-associated virus).
رج الغرفة بقوة لفصل الخلايا الملتصقة، مما يؤدي إلى إطلاق الخلايا التي تحتوي على الفيروس والجسيمات الفيروسية خارج الخلوية في الوسط.
انقل المحتويات إلى أنبوب ثم قم بالطرد المركزي لترسيب الخلايا المحتوية على الفيروس.
اجمع الطافي الذي يحتوي على الفيروس خارج الخلوي وانقله إلى زجاجة تخزين.
أعد تعليق الراسب في محلول التحلل ثم قم بالتحضين.
تعمل الإنزيمات والمنظفات الموجودة في المحلول المنظم على تحلل الخلايا وتحرير الفيروسات السليمة الموجودة داخل الخلايا إلى المحلول.
قم بطرد المستخلص مركزيًا لترسيب الحطام الخلوي. اجمع الطافي الذي يحتوي على الفيروس وأضفه إلى زجاجة التخزين نفسها التي تحتوي على الفيروس خارج الخلوي.
يُحفظ المعلق الفيروسي الخام في درجة حرارة منخفضة حتى إجراء المزيد من التنقية.
بعد الحضن، رُج غرفة زراعة الخلايا بقوة لفصل الخلايا حتى يبدو الوسط عكراً، ثم صبّه في أربعة أنابيب طرد مركزي سعة 500-milliliter.
قم بترسيب الخلايا عن طريق الطرد المركزي عند 18,000 x g لمدة 30 دقيقة عند 4 °C. صُب السائل الطافي المصفى في زجاجة PETG سعة 1 L، وأعد تعليق كتل الخلايا المترسبة في 50 mL من محلول التحلل (lysis buffer) في أنابيب طرد مركزي سعة 500 mL. احضن الأنابيب لمدة 60 دقيقة عند
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية