موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 3:35 دقيقة • August 31st, 2026
ابدأ باستخدام مستخلص خلوي مفلتر يحتوي على ناقلات الفيروس المرتبط بالغدّيات (AAV) وملوثات مشتقة من الخلية المضيفة.
مرر المستخلص عبر عمود تقارب يعتمد على الهيبارين.
ترتبط بروتينات القفيصة الفيروسية كهروستاتيكياً بمجموعات الهيبارين سالبة الشحنة.
اشطف العمود باستخدام محلول منظم لإزالة الملوثات غير المرتبطة.
قم بإضافة محلول منظم يحتوي على منظف لإذابة الحطام الغشائي.
اشطف مرة أخرى باستخدام المنظم الخالي من المنظفات.
أضف محلولاً منظماً مدعماً بالكاتيونات لإنشاء بيئة أيونية، ثم اغسل بمحلول منظم ذو ملوحة متوسطة لتحرير الشوائب ضعيفة الارتباط.
أضف محلولاً منظماً عالي الملوحة لفك الروابط بين الكبسيدة والهيبارين واستخلاص الجسيمات الفيروسية.
اجمع كسور الاستخلاص الغنية بالجسيمات الفيروسية السليمة وانقلها إلى أنابيب تركيز مركزية مزودة بأغشية ترشيح.
قم بطرد الأنابيب مركزياً لإزالة المحلول المنظم الزائد، ثم اجمع أجزاء الفيروس المركزة في أنبوبة.
اشطف الغشاء باستخدام المنظم لاستعادة الجسيمات الفيروسية المتبقية ورفع العائد إلى الحد الأقصى.
قم بإذابة lysate الخام عند درجة حرارة 4 °C طوال الليل.
بمجرد إذابته، قم بترشيحه باستخدام مرشح 0.22 micron. وقبل البدء مباشرة في خطوات التنقية، قم بخملة جهاز التركيز بالطرد المركزي بإضافة أربعة milliliters من منظم المعالجة المسبقة للترشيح لكل عمود heparin-Sepharose مستخدم. ضع الأ
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية