تنقية إنزيم الدمج الفيروسي باستخدام كروماتوغرافيا الألفة للهيبارين

ابدأ بكسر منزوع من إنزيم integrase الفيروسي المُنقى يحتوي على نوكلياز بكتيري متبقٍ كشوائب.

قم بتحميل العينة على عمود heparin-Sepharose تمت موازنته مسبقاً باستخدام محلول ربط منخفض الملوحة.

بينما يمر الخليط عبر العمود، يرتبط الإنتيجريز بربيطة الهيبارين بقوة أكبر من ارتباط النيوكلياز الملوث.

بعد ذلك، قم بزيادة تركيز الملح تدريجياً في المنظم المتدفق عبر العمود.

عند تركيزات الملح المنخفضة، تخرج النوكليازات ضعيفة الارتباط أولاً، بينما يخرج الإنتيجريز قوي الارتباط لاحقاً عند تركيزات ملح أعلى.

اجمع الكسور المستخلصة بشكل فردي لفصل النوكلياز الملوث عن الإنتيجريز.

أضف محلول منظم عينات SDS-PAGE إلى كل جزء وقم بالتسخين لتمسخ البروتينات. حمّل العينات على هلام SDS-PAGE وأجرِ الفصل الكهربائي.

افحص الهلام المصبوغ.

حدد الكسور التي تحتوي على حزمة إنتيغراز بارزة دون وجود بروتينات ملوثة مرئية، مما يشير إلى النقاء الظاهري.

لإجراء تجزئة باستخدام كروماتوغرافيا الألفة للهيبارين لإنزيم إنتيغريز الفيروس الرغوي النموذجي، قلل تركيز كلوريد الصوديوم في العينة إلى 200 millimolar بإضافة 1.5 حجم من المنظم C. ثم حمّل عينة إنزيم إنتيغريز الفيروس الرغوي النموذجي المخففة على عمود heparin Sepharose بمعدل تدفق 0.5 milliliters per minute مع حد أقصى للضغط يبلغ one megapascal. بعد غسل العمود وجمع التدرج والغسل النهائي، قم بتحليل الع