تكميم جزيئات الفيروس الكاذب عن طريق مقايسة اللويحات

استخدم طبقاً متعدد الآبار يحتوي على خلايا طلائية ثديية.

قم بتحضير تخفيفات تسلسلية لفيروس كاذب يحتوي على بروتينات سنبلة فيروس كورونا.

استبدل الوسط بمعلق فيروسي مخفف في كل بئر.

يتم التحضين مع الهز المتقطع للسماح لبروتينات السنبلة الفيروسية بالارتباط بمستقبلات الخلية المضيفة.

قم بإزالة الوسط. أضف وسطاً يحتوي على الميثيل سيليلوز (methylcellulose) لتكوين غطاء شبه صلب يحد من انتشار الفيروس، ثم قم بالتحضين.

يدخل الفيروس إلى الخلية ويطلق جينومه من الـ RNA.

يوجه الحمض النووي الريبوزي (RNA) تخليق حمض نووي ريبوزي فيروسي وبروتينات فيروسية جديدة، والتي تتجمع لتكوين جسيمات فيروسية تخرج من الخلية.

تُصيب الفيروسات المتحررة الخلايا المجاورة، مما يؤدي إلى تكوين منطقة شفافة تُسمى اللويحة (plaque).

قم بإزالة الطبقة العلوية واغسل الخلايا.

أضف صبغة ثم حضن الطبق مع الرج.

اغسل الآبار وجففها.

تقوم الصبغة بتلوين الخلايا، بينما تظل اللويحات شفافة.

قم بعدّ اللويحات المرئية في كل بئر لتحديد التركيز الفيروسي.

لتحديد العيار الفيروسي، يتم زراعة خلايا Vero E6 في أطباق ذات ستة آبار بكثافة استزراع تبلغ 6 × 10⁵ خلية لكل بئر، ثم تُحضن طوال الليل. وفي اليوم التالي، يتم إعداد سلسلة تخفيفات تسلسلية بمعدل عشرة أضعاف للمخزون الفيروسي عن طريق إضافة 900 µL من الوسط إلى سبعة أنابيب طرد مركزي دقيقة، وإضافة 100 µL من المخزون الفيروسي إلى ال