التعادل بوساطة الأجسام المضادة للفيروسات الكاذبة التي تعبر عن بروتين سنبلة فيروس كورونا باستخدام مصل المرضى

استخدم طبقاً متعدد الفجوات يحتوي في فجوة الاختبار على مصل مريض تم تثبيطه حرارياً ويحتوي على أجسام مضادة نوعية لفيروس كورونا. واستخدم مصلاً بشرياً سليماً كمجموعة ضابطة.

أضف الفيروسات الكاذبة التي تظهر بروتينات سنبلة فيروس كورونا وتحمل RNA مشفرًا للبروتين الفلوري الأخضر إلى عينات المصل، ثم قم بالحضن.

في بئر الاختبار، ترتبط الأجسام المضادة ببروتينات السنبلة (spike proteins) وتعمل على تحييد الفيروسات الكاذبة، بينما في بئر التحكم، لا ترتبط الأجسام المضادة غير المتخصصة ببروتينات السنبلة، مما يترك الفيروسات الكاذبة غير مرتبطة.

أضف المزيج إلى الطبقات الأحادية للخلايا الظهارية. قم بالحضن للسماح بالامتصاص الفيروسي.

أضف وسط تغطية شبه صلب إلى كل بئر لتقييد انتشار الفيروس. ثم قم بالتحضين.

في عينة الضبط، ترتبط الفيروسات الكاذبة غير المرتبطة بمستقبلات الخلايا، وتدخل إلى الخلايا، وتُطلق الـ RNA، وتُعبر عن الـ GFP، مما يؤدي إلى تكوين بؤر عدوى فلورية.

في بئر الاختبار، تفشل الفيروسات الكاذبة التي تم تحييدها بواسطة الأجسام المضادة في دخول الخلايا، مما يمنع تكوين بؤر العدوى.

قم بعدّ بؤر العدوى الفلورية تحت جهاز التصوير الفلوري.

يؤكد غياب بؤر العدوى في بئر الاختبار، مقارنةً بوجود بؤر عديدة في بئر التحكم، حدوث تحييد للفيروسات الكاذبة بواسطة مصل المريض بوساطة الأجسام المضادة.

لزرع الخلايا من أجل مقايسة التعادل، اس