موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 4:09 دقيقة • September 30th, 2026
ابدأ بصفيحة متعددة الآبار تحتوي على خلايا ثديية تعرضت لفيروس فاكسينيا مؤتلف.
يشفر الفيروس المأشوب بروتينات فلورية خضراء وحمراء وزرقاء، بحيث يتم التحكم في كل منها بواسطة محفز خاص بمرحلة معينة لتتبع المراحل المبكرة والمتوسطة والمتأخرة من التعبير الجيني، على التوالي.
يدخل الفيروس الخلية عبر عملية الالتقام الخلوي بوساطة المستقبِلات، ثم يطلق لُبّه الفيروسي في السيتوبلازم.
تعمل آلية النسخ في اللب الفيروسي على تحفيز التعبير الجيني المبكر، والذي يتميز بفلورة خضراء.
تتوسط البروتينات المبكرة عملية إزالة غلاف الجينوم، مما يؤدي إلى إطلاق الحمض النووي الفيروسي في السيتوبلازم، حيث يقوم إنزيم DNA polymerase بتكرار الجينوم الفيروسي.
بعد ذلك، يؤدي التعبير الجيني المتوسط، كما تشير الفلورة الحمراء، إلى إنتاج عوامل نسخ أساسية لتنشيط الجينات المتأخرة.
بعد ذلك، يؤدي تعبير الجينات المتأخرة، كما يشير الفلورسنت الأزرق، إلى إنتاج البروتينات الهيكلية اللازمة لتكوين الفيريونات الناضجة.
أضف مادة تثبيت واحضن العينات لفترة وجيزة للحفاظ على الفلورة.
أزل المادة المثبتة، ثم أضف محلولاً منظماً.
استخدم مقياس الطيف الضوئي لقياس الفلورة وتحديد كمية التعبير الجيني الفيروسي الخاص بكل مرحلة في الخلايا المصابة.
ابدأ هذا البروتوكول بفصل خلايا HeLa النامية في طبق قطر 10 سنتيمتر. خفف الخلايا في وسط نمو لتصل الكثافة إلى 2.0 × 10⁵ خلية/م
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية