عزل وتنقية الفيروسات من أجسام الحشرات المصابة

خذ أجسام الحشرات المصابة بالفيروس والمعلقة في محلول منظم يحتوي على عامل مخلبي.

قم بالتجانس لتفتيت أنسجة الحشرة وتحرير المكونات داخل الخلوية، بما في ذلك الجسيمات الفيروسية وأيونات المعادن التفاعلية.

يرتبط عامل المخلبية بأيونات المعادن، مما يمنع تكوين أنواع الأكسجين التفاعلية ويحمي الجسيمات الفيروسية من التلف التأكسدي.

استخدام جهاز الطرد المركزي الفائق لترسيب الفيروس والحطام غير القابل للذوبان، ثم التخلص من السائل الطافي.

أضف محلولاً منظماً يحتوي على أملاح ومنظف، ثم أعد تعليق الراسب عن طريق السحب والضخ المتكرر بالماصة. يعمل المنظف على إذابة الحطام الغني بالدهون لتحرير الجسيمات الفيروسية المرتبطة به.

قم بإجراء الطرد المركزي لترسيب الحطام غير القابل للذوبان. اجمع الطافي الذي يحتوي على الجسيمات الفيروسية.

قم بترشيح السائل العلوي لإزالة البقايا المتبقية وجمع الرشاحة التي تحتوي على الفيروس.

أجرِ عملية الديلزة للراشح في الماء عند درجة حرارة منخفضة لإزالة المنظفات وأملاح المنظم الزائدة.

استبدل الماء بشكل دوري حتى تترسب الجسيمات الفيروسية. وبذلك يصبح الفيروس جاهزاً للاستخدام لاحقاً.

قم بتجنيس الأجسام الكاملة لحشرة H. vitripennis الإيجابية للفيروس في محلول منظم الفوسفات مع 0.02% DETCA عن طريق الرج الدوامي لفترات زمنية تبلغ عشر ثوانٍ تقريبًا حتى تختفي جميع الكتل النسيجية الكبيرة. استخلص الفيروس عبر الط