موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 3:31 دقيقة • September 30th, 2026
ابدأ بمزرعة من الخلايا الثديية في وسط منخفض المصل.
أضف معقد الحمض النووي والدهون إلى الخلايا.
يحتوي المعقد على بلازميدات تغليف الفيروسات البطيئة (lentiviral packaging plasmids) وبلازميد تعبير يشفر الجين المستهدف.
يتم التحضين للسماح بدخول المعقد إلى الخلايا.
استبدل الوسط لإزالة ما تبقى من كاشف عفن الخلية واتركه في الحاضنة.
داخل الخلية، تدخل جزيئات الـ DNA البلازميدية إلى النواة وتوجه عملية تخليق الـ RNA الفيروسي الذي يحمل الجين المراد دراسته والمكونات الفيروسية، بما في ذلك بروتينات القفيصة والغلاف، والنسخ العكسي، والإنتيغريز.
تتجمع هذه المكونات لتكوين جسيمات فيروسية لينتية مأشوبة تبرعم من غشاء الخلية المضيفة.
اجمع الوسط الذي يحتوي على الجزيئات الفيروسية المتحررة.
قم بإجراء الطرد المركزي لترسيب حطام الخلايا، ثم قم بترشيح السائل الطافي للفيروس لإزالة الملوثات المتبقية.
قم بالطرد المركزي بسرعة عالية لترسيب الجسيمات الفيروسية السليمة.
تخلص من الطافي وأعد تعليق راسب الفيروس في حجم صغير من الوسط الغذائي الطازج.
يُحفظ الفيروس lentivirus المؤتلف المركز في درجة حرارة منخفضة لاستخدامه في التطبيقات اللاحقة.
لبدء إنتاج الفيروس البطيء المركز، قم بنثر 1.5 × 10⁶ من خلايا HEK-293T في طبق بقطر 60 مم، وازرع الخلايا في وسط عادي عند درجة حرارة 37 °C في حضانة رطبة تحتوي على 5% CO2. وبعد 24 ساعة من التحضين، وعندما ت
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية