إنتاج جسيمات شبيهة بالفيروس قادرة على النسخ والتضاعف من فيروس إيبولا تحتوي على بروتين تقريري

ابدأ باستخدام بلازميد جينوم مصغر (minigenome plasmid) يحاكي جينوم فيروس إيبولا ويشفر البروتينات التركيبية الفيروسية، والبروتينات السكرية، ومراسل لوسيفيراز (luciferase reporter).

أضف البلازميدات المساعدة التي تشفر إنزيم T7 polymerase، والبروتين النووي الفيروسي، ومكونات البوليميراز الفيروسية الضرورية للتضاعف والنسخ.

أضف كاشف ترانسفيكشن (تعداء) قائماً على الدهون إلى البلازميدات، ثم قم بالرج الدوامي، وحضن الخليط لتكوين معقدات بلازميد-دهون.

أضف هذا الخليط إلى خلايا الكلى البشرية، وامزجه برفق، ثم قم بتحضينه.

يندمج المعقد الدهني مع الخلية، ومن ثم تدخل البلازميدات إلى الخلية.

تُشفر البلازميدات المساعدة البروتينات الخاصة بها.

لاحقاً، يقوم إنزيم T7 polymerase بنسخ المينيجينوم (minigenome) إلى RNA جينومي فيروسي، والذي يتم تغليفه على الفور بالبروتينات النووية.

يرتبط معقد البوليميراز الفيروسي بالحمض النووي الريبوزي (RNA) الجينومي الفيروسي وينسخه إلى حمض نووي ريبوزي رسول (mRNAs) فيروسي. وتنتج هذه الـ mRNAs بروتينات هيكلية وبروتينات سكرية فيروسية.

تتجمع البروتينات الفيروسية لتكوين جسيمات شبيهة بالفيروسات غير ممرضة وقادرة على النسخ والتضاعف، أو ما يعرف بـ trVLPs، والتي تحتوي على جين اللوسيفيريز المُبلّغ.

يتم الاستعاضة بوسط غذائي طازج للحفاظ على حيوية الخلايا ودعم إنتاج trVLP.

قم بنقل البلازميدات المطلوبة لإ