مقايسة قائمة على اللوسيفيريز لتقييم المركبات المضادة للفيروسات في خلايا الكلى الجنينية البشرية

ابدأ باستخدام لوحة متعددة الآبار تحتوي على تخفيفات متسلسلة من المركب المختبر لتقييم النشاط المضاد للفيروسات.

أضف معلق خلايا الكلى الجنينية البشرية المحتوي على فيروس الحصبة المؤتلف المعبر عن اللوسيفيراز إلى كل بئر.

يتم التحضين للسماح للخلايا بالالتصاق بقاع كل بئر.

في بئر التحكم الخالية من المركب المختبر، يندمج الفيروس مع غشاء الخلية ويطلق جينومه في السيتوبلازم.

يوجه الجينوم الفيروسي إنتاج الحمض النووي الريبوزي (RNA) والبروتينات الفيروسية، جنباً إلى جنب مع بروتين المراسيل لوسيفيريز.

في آبار الاختبار، يثبط المركب المضاد للفيروسات التكاثر الفيروسي، مما يقلل من إنتاج luciferase.

أضف ركيزة محددة للوسيفرين إلى كل بئر، والتي تتفاعل مع اللوسيفرين وتصدر لومينيسنس (تألقاً حيوياً).

استخدم قارئ الصفائح لقياس شدة اللمعان في كل بئر.

يشير انخفاض التألق في آبار الاختبار مقارنة ببئر التحكم إلى تثبيط فيروسي.

يشير الانخفاض التدريجي في اللمعان مع زيادة تركيز المركب إلى تثبيط تضاعف الفيروس المعتمد على الجرعة.

أضف ميكرولتر واحدًا من لوحة تخفيف المركب إلى لوحة زراعة الأنسجة البيضاء ذات الرموز الشريطية. كرر هذه العملية مرتين لإنشاء مجموعة ثلاثية من لوحات الاختبار. بعد ذلك، املأ لوحات زراعة الأنسجة بـ 50 ميكرولتر من وسط الزراعة. الآن، قم بتحضير 37.5 ملليلتر من خلايا HEK-293T المعلقة في وسط DMEM المكمل بتركيز 600,000