عزل فيروس عملاق واحد من مجموعة فيروسية مختلطة باستخدام الأميبا

ابدأ باستخدام الأميبا المستزرعة في وسط تجويع يحتوي على عوامل مضادة للميكروبات لمنع التلوث. تعمل الأميبا كعائلات قابلة للإصابة بالفيروسات العملاقة.

أضف معلقاً فيروسياً مخففاً يحتوي على مجموعة مختلطة من فيروسين عملاقين.

ضع طبق الزرع في كيس لمنع تبخر الوسط ثم قم بالتحضين.

يزيد تخفيف الفيروس من احتمالية مواجهة كل أميبا لنوع واحد فقط من الفيروسات العملاقة.

تقوم الأميبا بابتلاع الفيروسات، التي تتكاثر داخل الخلايا، مما يؤدي إلى استدارة الخلايا المصابة وانفصالها، وهو ما ينتج عنه تأثيرات اعتلال خلوي.

راقب المزرعة تحت مجهر ضوئي للتأكد من ظهور العلامات المرضية الخلوية.

بعد ذلك، انقل الطبق إلى منصة مجهر مقلوب.

ضع أنبوبًا شعريًا دقيقًا مثبتًا على مُناور مجهري تحت مجهر مقلوب. يحتوي الأنبوب الشعري الدقيق على زيت معدني متوافق حيويًا للتحكم في عملية سحب الخلايا.

باستخدام الأنبوب الشعري الدقيق، قم بسحب خلية واحدة مستديرة ومصابة برفق، ثم أطلقها في مزرعة أميبا جديدة. قم بالتحضين.

يتم تحرير النسل الفيروسي المتراكم داخل الخلية المصابة عن طريق الإخراج الخلوي، وينتشر لإصابة الخلايا المجاورة، مما يؤدي إلى توسيع مجتمع الفيروس العملاق المنفرد.

قم بإجراء تخفيف تسلسلي للعينة الفيروسية في وسط تجويع في آبار مختلفة. قم بتلقيح ملي لترين من 10⁶ Vermamoeba vermaformis الموجودة في كل طبق بتري بـ 100 ملي لتر من اللقاح المختلط.

ب