إنتاج فيروس حصبة مأشوب يشفر بروتيناً محفزاً للمناعة

ابدأ بمعلق ليبوزومات يغلف بلازميد جينوم الفيروس المضاد لفيروس الحصبة المؤتلف وبلازميدات مساعدة تشفر البروتينات الفيروسية الأساسية.

يحتوي بلازميد الأنتيجينوم على cDNA لجينوم فيروس الحصبة، والذي تم تعديله للتعبير عن بروتينات محفزة للمناعة وبروتين مراسل فلوري في الخلايا المصابة.

استخدم مستنبت خلايا منتجة للفيروس يحتوي على مضادات حيوية لمنع التلوث.

أضف معلق الليبوزوم إلى المزرعة ثم قم بالتحضين.

تندمج الجسيمات الشحمية مع غشاء الخلية لإيصال البلازميدات.

تقوم آليات الخلية المضيفة بنسخ cDNA الخاص بالجينوم المضاد إلى RNA، ونسخ البلازميدات المساعدة إلى mRNAs، مما يسمح بالتعبير البروتيني وتكوين معقد التضاعف الفيروسي. وينتج هذا المعقد RNA جينومي، وهو ما يتيح التعبير عن البروتين الفيروسي.

يتجمع الحمض النووي الريبي (RNA) الجينومي مع البروتينات الفيروسية لإنتاج جزيئات فيروسية مأشوبة.

تُعبر الخلايا المصابة أيضاً عن بروتين التقرير الفلوري من أجل التصوير المجهري، وتنتج البروتين المحفز للمناعة المشفر في الفيروس.

تُشكل الخلايا المصابة مدمجات خلوية متعددة النوى، وهي سمة مميزة للتأثير المرضي الخلوي لفيروس الحصبة.

استخدم المجهر الفلوري لتحديد المدمجات الخلوية الفلورية الكبيرة، مما يؤكد نجاح استعادة الفيروس المؤتلف.

لاستعادة فيروس الحصبة من cDNA، قم بتوزيع خلايا منتجة لفيروس الحصبة بالتساوي في طبق ذي 6 آبار قبل 24