إنتاج وحصاد الخلايا الظهارية المنتجة للفيروسات العلاجية

ابدأ باستخدام خلايا طلائية كلوية مستزرعة يتم الحفاظ عليها في وسط يحتوي على المصل.

استبدل هذا الوسط بوسط خالٍ من المصل يحتوي على الفيروسات المعدلة وراثياً والتي تحمل جينات معدلة للمناعة للاستخدام العلاجي.

قم بحضن الخلايا للسماح للفيروس بالارتباط بمستقبلات سطح الخلية.

قم بإزالة الطافي الذي يحتوي على الفيروسات المتبقية غير الملتصقة.

أضف وسطاً طازجاً يحتوي على المصل لضمان بقاء الخلايا، ثم قم بالتحضين.

أثناء الحضن، يدخل الفيروس عبر الالتقام الخلوي بوساطة المستقبلات، ويقوم بتحرير جينومه، ثم ينتج هذا الجينوم الحمض النووي الريبوزي الفيروسي (viral RNAs).

يتضاعف الجينوم الفيروسي، بينما ينتج الحمض النووي الريبي (RNA) الفيروسي بروتينات فيروسية جديدة.

تتجمع البروتينات الفيروسية لتكوين جسيمات فيروسية جديدة ويتم إطلاقها في الوسط المحيط.

تدخل هذه الفيروسات الناتجة إلى الخلايا المجاورة، مما يتسبب في حدوث العدوى وتكوين تجمعات من الخلايا المصابة.

قم بكشط الطبقة الخلوية الأحادية برفق لحصاد الخلايا التي تنتج النسل الفيروسي العلاجي.

اجمع المعلق في أنبوب واحفظه في درجة حرارة منخفضة لإجراء مزيد من التحليل.

لتحليل حركية تضاعف فيروس الحصبة، قم بزراعة 100,000 من خلايا Vero في 1 milliliter من DMEM مع 10 percent FBS لكل بئر في أطباق ذات 12 بئراً، مع تخصيص بئرَين على الأقل لكل نقطة زمنية مطلوبة، وذلك قبل يوم واحد من العدو